甲氨蝶呤原料藥－甲氨蝶呤－高效液相色譜法

本方法采用高效液相色譜法測定甲氨蝶呤原料藥中甲氨蝶呤的含量。

本方法適用于甲氨蝶呤原料藥。

1. 乙腈

2. 7.0%枸櫞酸溶液

3. 2.0%無水磷酸氫二鈉溶液

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按甲氨蝶呤峰計算應(yīng)不低于1000。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動相：乙腈 7.0%枸櫞酸溶液 2.0%無水磷酸氫二鈉溶液=10 10 80

2.2 檢測波長：302nm

2.3 柱溫：室溫

1. 對照品溶液的制備

精密稱取甲氨蝶呤對照品適量，加流動相溶解并定量稀釋成每1mL中約含0.1mg的溶液，即為對照品溶液。

2.供試品溶液的制備

精密稱取供試品適量，加流動相溶解并定量稀釋成每1mL中約含甲氨蝶呤0.1mg的溶液，即為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器于波長302nm處測定甲氨蝶呤（C₂₀H₂₂N₈O₅)的峰面積，計算出其含量。