全天麻膠囊-天麻素測(cè)定-高效液相色譜法

本方法采用高效液相色譜法測(cè)定全天麻膠囊中天麻素的含量。

本方法適用于中成藥全天麻膠囊。

供試品加入甲醇超聲提取，殘?jiān)�甲醇洗滌定容，用高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)270nm處檢測(cè)天麻素的吸收值，計(jì)算其含量。

1.甲醇（優(yōu)級(jí)純)

2.乙腈（色譜純)

3.磷酸

4. 天麻素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所)

1 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱：十八烷基硅膠鍵合硅膠為填充劑（Nona-PaK C₁₈色譜柱，4.0mm×250mm，4μm)，理論板數(shù)按天麻素計(jì)為1700。

1.3紫外吸收檢測(cè)器

1.4 數(shù)據(jù)處理器

1.5超聲發(fā)生器

2 色譜條件

2.1流動(dòng)相：乙腈＋水＝4＋96

2.2流速：0.7ml/min

2.3檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm

2.4柱溫：30℃

1. 對(duì)照品溶液的制備

取經(jīng)80℃干燥恒重的天麻素對(duì)照品約12mg，精密稱定，置25mL容量瓶中，加甲醇溶解，稀釋至刻度，搖勻，做成貯備液(0.4768mg/mL)。精密吸取貯備液5mL，置25mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液(0.09536mg/mL)。將天麻素貯備液(0.4768mg/ml)分別稀釋為0.2384mg/ml，0.1192mg/0.0596mg/ml，0.0298mg/ml的濃度系列。

2. 供試品溶液的制備

取全天麻膠囊20粒，倒出其內(nèi)容物天麻粉，精密稱定重量，得出平均每粒膠囊所含天麻粉的重量。再將以上天麻粉混勻，精密稱定約0.5g，置25mL具塞錐形瓶中，每次加入甲醇10mL，超聲提取60分鐘，共提取2次，最后一次與天麻粉共浸24小時(shí)。殘?jiān)��?～5mL甲醇洗滌。合并甲醇提取液，置25mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度即得供試液。

1.　標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍

分別進(jìn)樣10μl，測(cè)定峰面積，以天麻素量(μg)為橫座標(biāo)，峰面積為縱座標(biāo)Y，得回歸方程Y=-24101.9 401634X，r=0.9999，結(jié)果表明天麻素在0.298-4.768μg間有良好的線性關(guān)系。

2. 供試品的含量測(cè)定

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液10μL注入高效液相色譜儀測(cè)定峰面積，以外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算出其含量。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。