板藍根--精氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、脯氨酸、纈氨酸含量測定--HPLC

儀器設(shè)備  Agilent1100系列高效液相色譜儀，包括Agilent1100泵（雙泵，高壓剃度)，自動進樣器，DVD檢測器，柱溫箱，Agilent色譜工作站。

色譜條件  色譜柱：Phenomenex ODS 3(5μm,250mm×4mm)；流動相A：稱取醋酸鈉30g，加3400mL水溶解，用醋酸調(diào)PH至6.5，然后加水至3700mL，加乙腈280mL，用0.45μm濾膜過濾；流動相B：乙腈-水（4:1)。

梯度洗脫：流速1.0 mL/min，流動相A與B比例，0.00min為100:0；18.00min為91:9；18.01min為80:20；40.00min為67:33；40.01min為0:100，保持5min。

對照品溶液的制備  取對照品蘇氨酸10mg，丙氨酸4mg，纈氨酸5mg精密稱定，加水溶解并定容至10mL，再取精氨酸和脯氨酸對照品20mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加入上述蘇氨酸、丙氨酸、纈氨酸對照品溶液，再加水定容至刻度，制成每lmL分別含0.15，0.01，0.004，0.15，0.005mg的混合對照液。

內(nèi)標溶液的制備  取正亮氨酸對照品4.5mg，加0.1mol/L鹽酸，制成每1mL含0.9mg的內(nèi)標溶液。

供試品溶液的制備  取板藍根藥材，粉碎成粗粉，取0.5g，精密稱定，精密加入水50mL，超聲30min，補重，濾過，取濾液，即得。

對照品和供試品溶液衍生化  取對照品溶液或供試品溶液200μL，加正亮氨酸內(nèi)標溶液20μL，加入0.1mol/L異硫氰酸苯酯乙腈溶液100μL，1mol/L三乙胺乙腈溶液100μL，混勻，室溫下放置1h，加入正己烷400μL，振搖，放置10min，取下層溶液，即得。