| 公開(公告)號 | CN1986827A |
| 公開(公告)日 | 2007.06.27 |
| 申請(專利)號 | CN200610166504.6 |
| 申請日期 | 2006.12.27 |
| 專利名稱 | 一種塊菌多糖的制備方法 |
| 主分類號 | C12P19/04(2006.01)I |
| 分類號 | C12P19/04(2006.01)I;C12R1/645(2006.01)N |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 湖北工業(yè)大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 湯亞杰;李冬生;孔國平 |
| 地址 | 430068湖北省武漢市武昌南湖李家墩 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 武漢宇晨專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 王敏鋒 |
| 國省代碼 | 湖北;42 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種塊菌多糖的制備方法，它包括下列步驟： A、斜面菌種培養(yǎng)：斜面菌種培養(yǎng)基克/升為：麥芽糖30-150、硫酸鎂0.1-10、磷酸二氫鉀0.1-10、瓊脂10-30、馬鈴薯提取液1.0升、pH值為5-8，滅菌條件為：121℃、20分鐘，將中國塊菌接入新鮮配置的斜面培養(yǎng)基中，置于生化培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度15-40℃，培養(yǎng)時間2-20天； B、一級液體種子培養(yǎng)：將步驟A中培養(yǎng)的斜面菌種轉(zhuǎn)接入裝有一級液體種子培養(yǎng)基的搖瓶中進(jìn)行一級液體種子培養(yǎng)，一級液體種子培養(yǎng)基克/升為：麥芽糖30-150、蛋白胨5-50、硫酸鎂0.1-10、磷酸二氫鉀0.1-10、pH值與A步相同；培養(yǎng)溫度與A步相同、搖床轉(zhuǎn)速50-300rpm、培養(yǎng)時間與A步相同；該培養(yǎng)液即為含有菌種的一級液體種子； C、二級液體種子培養(yǎng)：將步驟B中培養(yǎng)的一級液體種子轉(zhuǎn)接入搖瓶中進(jìn)行二級液體種子培養(yǎng)，一級液體種子培養(yǎng)基的配方與二級液體種子培養(yǎng)基的配方相同；培養(yǎng)條件為：接種量按體積比為10％、溫度與A步相同、搖床轉(zhuǎn)速與B步相同、培養(yǎng)時間2-10天；該培養(yǎng)液即為含有菌種的二級液體種子； D、液體深層發(fā)酵：將步驟C中培養(yǎng)的二級液體種子轉(zhuǎn)接搖瓶進(jìn)行液體深層發(fā)酵，發(fā)酵培養(yǎng)基配方與B步相同，pH值為5-9，發(fā)酵條件：接種量與C步相同、溫度與A步相同、搖床轉(zhuǎn)速與B步相同、發(fā)酵時間與B步相同； E、塊菌胞外多糖的測定：將步驟D中所獲得的含有菌絲體的發(fā)酵液離心/5000rpm、30分鐘，取其上清液用于塊菌胞外多糖的測定，采用乙醇沉淀法測定液體深層發(fā)酵所獲得的塊菌胞外多糖，發(fā)酵上清液加入四倍體積的無水乙醇，混勻后靜置過夜，13000rpm離心4-6分鐘后取沉淀，用等量的80％乙醇清洗后在13000rpm下離心4-6分鐘得到胞外多糖。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種塊菌多糖的制備方法，其步驟首先是將中國塊菌菌種接入新鮮的斜面菌種培養(yǎng)基中進(jìn)行斜面菌種培養(yǎng)；其次是將斜面菌種轉(zhuǎn)接入裝有一級液體種子培養(yǎng)基的搖瓶中進(jìn)行一級液體種子培養(yǎng)；第三是將一級液體種子轉(zhuǎn)接搖瓶中進(jìn)行二級液體種子的擴(kuò)大培養(yǎng)；第四是將二級液體種子轉(zhuǎn)接搖瓶進(jìn)行液體深層發(fā)酵；第五是塊菌胞外多糖的測定。本發(fā)明過程結(jié)束時發(fā)酵液中的胞外多糖產(chǎn)量可達(dá)2.30克/升，制備的塊菌多糖具有抑制腫瘤的活性。本發(fā)明操作簡單，成本低，有利于進(jìn)一步工業(yè)化放大及推廣應(yīng)用。 |
| 國際公布 |
