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一種利用甲醇酵母系統(tǒng)高效表達tPA等外源蛋白的方法及其表達產(chǎn)物的純化制備技術

公開(公告)號 CN1757745A  
公開(公告)日 2006.04.12  
申請(專利)號 CN200410017881.4  
申請日期 2004.04.23  
專利名稱 一種利用甲醇酵母系統(tǒng)高效表達tPA等外源蛋白的方法及其表達產(chǎn)物的純化制備技術  
主分類號 C12P21/00(2006.01)I  
分類號 C12P21/00(2006.01)I;C12N15/62(2006.01)I  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權  
申請(專利權)人 黃秀東;唐德江  
發(fā)明(設計)人 黃秀東;李樹剛;于廷和  
地址 201206上海市浦東新區(qū)碧云路333弄中天碧云苑18號603室  
頒證日  
國際申請  
進入國家日期  
專利代理機構 重慶市恒信專利代理有限公司  
代理人 劉小紅  
國省代碼 上海;31  
主權項 一種通過基因工程菌株制備一大類目的蛋白或多肽的方法,通過此方法表達出的蛋白質具有CP-LS-CS-IP樣的特征性結構, 其中CP-代表伴侶蛋白(CP-,ChaperonProtein) LS-指連接肽的序列(LS-,LinkerSquence) CS-是蛋白酶法或化學法切割時的識別肽段序列(CS-,CleavageSquence) IP-表示目的蛋白或多肽(IP,InterestofProtein/Peptide)。  
摘要 本發(fā)明涉及一種甲醇酵母通用表達載體PICZa-DoI的構建,其關鍵是可以利用該表達系統(tǒng)以融合蛋白的方式生產(chǎn)一類常規(guī)方法難以高水平表達的外源重組蛋白。采用此表達系統(tǒng)已經(jīng)成功的表達了突變型人組織纖溶酶原激活物(rPA)、人膜聯(lián)蛋白V-尿激酶活性片段融合蛋白(Anx-scUK)和突變型人神經(jīng)生長因子(mut-hNGF)等。該表達系統(tǒng)的產(chǎn)生的融合蛋白可以通過螯合層析(Chelating Sepharose FF)介質從發(fā)酵液中直接捕獲,經(jīng)過脫鹽、酶切或化學切割開融合蛋白,再用常規(guī)的層析介質就可以純化制備出純度合乎要求的目的蛋白作為醫(yī)藥用途。  
國際公布  
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