公開(公告)號(hào)
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CN1244694C
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公開(公告)日
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2006.03.08
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN00113802.2
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申請(qǐng)日期
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2000.04.28
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專利名稱
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牦牛血超氧化物歧化酶制備方法
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主分類號(hào)
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C12N9/08(2006.01)I
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分類號(hào)
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C12N9/08(2006.01)I;C07K1/36(2006.01)I;A61K38/44(2006.01)I;A61K8/66(2006.01)I;A23L1/30(2006.01)I;A61P25/28(2006.01)I
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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蘇 普
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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蘇 普
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地址
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730050甘肅省蘭州市小西湖鹼溝沿211號(hào)
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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蘭州中科華西專利代理有限公司
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代理人
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王玉雙
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國(guó)省代碼
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甘肅;62
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主權(quán)項(xiàng)
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一種牦牛血超氧化物歧化酶的制備方法,其特征在于包括下述工藝步驟:①將牦牛血除去血漿得紅血球,用紅血球體積的2-4倍、0.5-1.5%的鹽液清洗紅血球2-6次,再往紅血球內(nèi)加入體積比為1∶(0.5-1.5)的水,攪拌后使其溶血;②將溶血液冷卻至-4-4℃,攪拌加入溶血液體積的0.15-0.35倍、溫度為至少-10℃、90-98%的醇和溶血液體積的0.1-0.2倍、90-98%的氯仿,混合攪拌,再加入溶血液體積的0.2倍的水稀釋,離心去除雜蛋白,得蛋黃色上清液,測(cè)定其SOD總活力;③將乙醇相上清液升至室混,加入上清液體積的0.5-1.5倍的固體磷酸氫二鉀溶解,靜置分離得上清液,上相液含有氯仿、醇和少量鹽,離心上相液得淡藍(lán)色上清液;④將③步中最后的上清液冷卻至至少0℃,邊攪邊加入上清液體積的0.5-1倍、溫度為至少-10℃的丙酮,離心后得藍(lán)綠色沉淀,然后往沉淀物中加入沉淀物體積的0.5-1.5倍的水溶解;溶解液放透析袋中相對(duì)于2.5mM、pH7.6的KH2PO4-K2HPO4緩沖液透析,離心透析液得淡綠色清液;⑤將淡綠色清液超濾即得牦牛血紅胞超氧化物歧化酶。
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摘要
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本發(fā)明涉及一種牦牛血超氧化物歧化酶及其提取純化工藝和應(yīng)用,所述的超氧化物歧化酶是將牦牛血經(jīng)去血漿、洗滌、溶血、抽提去雜蛋白、分離、沉淀、透析、超濾濃縮后得到牦牛血SOD;本發(fā)明的酶總活力高達(dá)90萬單位/l,平均酶比活為13000u/mg,本發(fā)明的工藝可減少SOD的酶總活損失,得率高、生產(chǎn)周期短、使用試劑省、操作簡(jiǎn)單;本發(fā)明可作藥品、保健品和食品、化妝品添加劑用。
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國(guó)際公布
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