| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1273601C |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2006.09.06 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200410039594.3 |
| 申請(qǐng)日期 | 2004.02.19 |
| 專利名稱 | 一種高效篩選目的蛋白的表達(dá)載體，其制備方法及用途 |
| 主分類號(hào) | C12N15/64(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N15/64(2006.01)I;C12N15/31(2006.01)I;C12N15/67(2006.01)I;C12N15/62(2006.01)I;C07K16/00(2006.01)I;C07K19/00(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 陳立勇;解志剛;郭 寧;沈倍奮 |
| 地址 | 100850北京市海淀區(qū)太平路27號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | |
| 代理人 | |
| 國(guó)省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種真核表達(dá)載體，該載體是以PCI-neo為基礎(chǔ)改構(gòu)獲得，其特征在于：①該載體中neo基因被置換為dhfr基因；②在CMVI.E.啟動(dòng)子后連入的是記載于GENBANK登錄號(hào)為A22466和A22467的anti-c-erbB2-scFv基因及人抗體基因IgGlFc段基因；③IgGlFc段基因之后連入白細(xì)胞介素2基因，抗體基因和IL-2基因一起構(gòu)成融合基因；④融合基因后面連入內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)IRES序列和第546位鳥(niǎo)嘌呤突變?yōu)樾叵汆奏さ耐蛔僋eo基因；⑤該雙順?lè)醋颖磉_(dá)載體被命名為pCMV-HFI-mNeo。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開(kāi)了一種高效篩選目的蛋白的表達(dá)載體，其制備方法及用途。發(fā)明人通過(guò)在含有CMV啟動(dòng)子和dhfr擴(kuò)增系統(tǒng)的真核表達(dá)載體中引入一個(gè)內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)，將anti-erbB2-scFv-Fc基因與IL-2的融合基因與新霉素抗性基因連接。利用PCR方法對(duì)Neo基因進(jìn)行點(diǎn)突變，構(gòu)建成表達(dá)載體pCMV-HFI-mNeo。本載體特點(diǎn)在于通過(guò)引入IRES使融合蛋白基因和Neo基因在同一個(gè)啟動(dòng)子啟動(dòng)下共表達(dá)；通過(guò)對(duì)Neo基因的點(diǎn)突變?nèi)趸疦eo基因表達(dá)產(chǎn)物活性，從而提高了陽(yáng)性表達(dá)克隆的篩選效率，大大減少了篩選工作量，獲得了目的基因的穩(wěn)定高效表達(dá)克隆。 |
| 國(guó)際公布 |
