| 公開(公告)號(hào) | CN1252259C |
| 公開(公告)日 | 2006.04.19 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200410019057.2 |
| 申請(qǐng)日期 | 2004.04.20 |
| 專利名稱 | 人肝癌轉(zhuǎn)移亞克隆細(xì)胞系及其建立方法 |
| 主分類號(hào) | C12N15/08(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N15/08(2006.01)I;C12N13/00(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 南開大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 葉麗虹;張曉東;秦宵然;朱惠芳;王洪輝 |
| 地址 | 300071天津市衛(wèi)津路94號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 天津市學(xué)苑有限責(zé)任專利代理事務(wù)所 |
| 代理人 | 解松凡 |
| 國(guó)省代碼 | 天津;12 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種人肝癌轉(zhuǎn)移亞克隆細(xì)胞系，其特征是所述人肝癌轉(zhuǎn)移亞克隆細(xì)胞系與親本細(xì)胞系H7402形成配對(duì)關(guān)系，所述人肝癌轉(zhuǎn)移亞克隆細(xì)胞系是用下述方法建立的：(1)接種SCID鼠：將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人肝癌細(xì)胞H7402單細(xì)胞懸液，細(xì)胞數(shù)量為1～4×107/0.2ml接種于經(jīng)Cs137γ射線照射過(guò)的SCID鼠腋背部皮下；(2)確認(rèn)轉(zhuǎn)移部位：將荷瘤SCID鼠處死，對(duì)各個(gè)組織的病理切片進(jìn)行顯微鏡下觀察，確定其轉(zhuǎn)移部位為肺臟；(3)原代培養(yǎng)：在接種人肝癌細(xì)胞H7402后55-67天，將荷瘤SCID鼠處死，無(wú)菌解剖，取出肺臟，進(jìn)行原代培養(yǎng)，方法如下：用pH7.2的D-Hanks生理緩沖液漂洗組織塊3次，去除血液、脂肪、神經(jīng)組織、結(jié)締組織和壞死組織；將肺組織剪切成0.5-5mm3小塊；接種細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，使瓶底向上，在37℃孵箱內(nèi)，空氣中含體積百分比為5％的CO2條件下培養(yǎng)；2-4小時(shí)后，向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入8-10ml內(nèi)含20％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，靜置培養(yǎng)，原代培養(yǎng)每3天換液一次，待從組織塊生長(zhǎng)出大量的貼壁細(xì)胞，去除已漂浮的組織塊和殘留的血細(xì)胞；(4)傳代培養(yǎng)：將去掉組織的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)，具體步驟如下：移去原代培養(yǎng)的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)液，向培養(yǎng)瓶中加入2ml質(zhì)量體積百分比為0.25％胰蛋白酶溶液，置37℃孵箱中2-3分鐘，觀察到細(xì)胞出現(xiàn)回縮、細(xì)胞間隙增大，吸除胰蛋白酶溶液，加入8-10ml內(nèi)含20％胎牛血清RPMIl640培養(yǎng)液，使之形成細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)，接種于新的培養(yǎng)瓶，當(dāng)細(xì)胞傳代到第三代時(shí)，加入的RPMI1640培養(yǎng)液內(nèi)含胎牛血清為10％，細(xì)胞生長(zhǎng)良好，形態(tài)逐漸均一，即建立了一種來(lái)源于親本人肝癌細(xì)胞H7402的肝癌轉(zhuǎn)移亞克隆細(xì)胞系。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種人肝癌轉(zhuǎn)移亞克隆細(xì)胞系及其建立方法，所述人肝癌轉(zhuǎn)移亞克隆細(xì)胞系是用下述方法建立的：將人肝癌細(xì)胞H7402單細(xì)胞懸液接種于SCID鼠；確認(rèn)轉(zhuǎn)移部位為肺臟；原代培養(yǎng)；傳代培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞傳代到第三代以后，將培養(yǎng)液中的胎牛血清濃度降為10％，細(xì)胞生長(zhǎng)良好，形態(tài)逐漸均一，即建立了一種來(lái)源于親本人肝癌細(xì)胞H7402的肝癌轉(zhuǎn)移亞克隆細(xì)胞系，并與親本細(xì)胞形成配對(duì)關(guān)系，為肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的研究提供新的實(shí)驗(yàn)材料；可用于篩選肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因；可用于篩選肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白；可用于篩選抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥物；可用于腫瘤轉(zhuǎn)移分子機(jī)理的研究；可用于進(jìn)行腫瘤轉(zhuǎn)移DNA疫苗的研究。 |
| 國(guó)際公布 |
