| 公開(公告)號 | CN1737149A |
| 公開(公告)日 | 2006.02.22 |
| 申請(專利)號 | CN200510035634.1 |
| 申請日期 | 2005.07.07 |
| 專利名稱 | 一種用于分離抗栓物質(zhì)的定向進(jìn)化方法及其分離的抗栓物質(zhì)與純化方法 |
| 主分類號 | C12N15/62(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/62(2006.01)I;C12N15/31(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12N15/81(2006.01)I;C12N15/87(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 劉秋云;何建國 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 劉秋云;何建國;李子勁 |
| 地址 | 510275廣東省廣州市新港西路135號中山大學(xué)生物工程研究中心 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 廣州粵高專利代理有限公司 |
| 代理人 | 陳 衛(wèi) |
| 國省代碼 | 廣東;44 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種用于分離抗栓物質(zhì)的定向進(jìn)化方法，其包括如下步驟：(1)構(gòu)建酵母α交配因子前導(dǎo)肽與部分隨機(jī)肽的融合DNA片段；(2)插入雙酶切并用堿性磷酸酶處理的含有誘導(dǎo)型啟動子的穿梭載體；(3)穿梭載體電激轉(zhuǎn)化大腸桿菌，提取質(zhì)粒后電激轉(zhuǎn)化釀酒酵母；(4)轉(zhuǎn)接轉(zhuǎn)化子至棉子糖/半乳糖液體誘導(dǎo)培養(yǎng)基，誘導(dǎo)培養(yǎng)；(5)取培養(yǎng)物，離心取上清，調(diào)pH至中性，加入凝血酶，混勻；1分鐘后加入纖維蛋白原，混勻；取無沉淀產(chǎn)生、沉淀量少或產(chǎn)生沉淀時(shí)間相對長的活性轉(zhuǎn)化子； |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種用于分離抗栓物質(zhì)的定向進(jìn)化方法及其分離的抗栓物質(zhì)與純化方法。本發(fā)明通過構(gòu)建酵母α交配因子前導(dǎo)肽與部分隨機(jī)肽的融合DNA片段；插入雙酶切并用堿性磷酸酶處理的含有誘導(dǎo)型啟動子的穿梭載體；電激轉(zhuǎn)化大腸桿菌，提取質(zhì)粒后電激轉(zhuǎn)化釀酒酵母；轉(zhuǎn)接轉(zhuǎn)化子至棉子糖/半乳糖液體誘導(dǎo)培養(yǎng)基；取誘導(dǎo)了7天的培養(yǎng)物，離心取上清；做抑制凝血酶試驗(yàn)，篩選陽性轉(zhuǎn)化子。本發(fā)明的定向進(jìn)化方法能簡單、高效地發(fā)現(xiàn)抗栓肽；這將為抗栓藥物和其它藥物開發(fā)開辟新途徑。 |
| 國際公布 |
