| 公開(公告)號 | CN1733929A |
| 公開(公告)日 | 2006.02.15 |
| 申請(專利)號 | CN200510028285.0 |
| 申請日期 | 2005.07.29 |
| 專利名稱 | 一種重組人復(fù)合α干擾素的制備方法 |
| 主分類號 | C12P21/02(2006.01)I |
| 分類號 | C12P21/02(2006.01)I;C12N15/20(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 華東理工大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 儲 炬;郝玉有;張嗣良;莊英萍;史琪琪;王永紅;杭海峰;劉志敏;楊士珍;吳康華 |
| 地址 | 200237上海市徐匯區(qū)梅隴路130號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 上海順華專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 陳淑章 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種重組人復(fù)合α干擾素(cIFN)制備方法，其主要步驟是：將酵母工程菌(PichiapastorisGS115/pPIC9K-cIFN)經(jīng)種子培養(yǎng)、發(fā)酵罐培養(yǎng)、外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)及目標(biāo)蛋白純化后獲得cIFN，其特征在于，在外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)啟動時加入Tween-20、Tween-80、SDS、TritonX-100、TritonX-114、NP-40、CHAPS、Zwittergent3-14、LiDS、膽酸鈉、脫氧膽酸鈉、辛匍糖苷(Octylglucoside)或/和Brij35，加入量為0.01～10g/L發(fā)酵液；外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)的溫度控制在20～30℃；外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)時發(fā)酵液的pH值控制在3.0～7.0且發(fā)酵液中的甲醇含量控制在10g/L發(fā)酵液以下。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種經(jīng)真核表達(dá)制備重組人復(fù)合α干擾素(cIFN)制備方法，其主要步驟是：將酵母工程菌(Pichia pastoris GS115/pPIC9K-CIFN)經(jīng)種子培養(yǎng)、發(fā)酵罐培養(yǎng)、外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)及目標(biāo)蛋白純化后獲得cIFN，其特征在于，在外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)啟動時加入Tween-20、Tween-80、SDS、Triton X-100、Triton X-114、NP-40、CHAPS、Zwittergent3-14、LiDS、膽酸鈉、脫氧膽酸鈉、辛匍糖苷或/和Brij35，加入量為0.01～10g/L發(fā)酵液；外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)的溫度控制在20～30℃；外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)時發(fā)酵液的pH值控制在3.0～7.0且發(fā)酵液中的甲醇含量控制在1.0～10.0g/L發(fā)酵液。本發(fā)明不僅實(shí)現(xiàn)了cIFN的高密度高發(fā)酵表達(dá)，而且使cIFN在發(fā)酵液中維持了正確的單體分子狀態(tài)和生物活性，大大抑制了cIFN聚合體和降解產(chǎn)物的形成。 |
| 國際公布 |
