| 公開(公告)號(hào) | CN1706946A |
| 公開(公告)日 | 2005.12.14 |
| 申請(專利)號(hào) | CN200410055550.X |
| 申請日期 | 2004.08.04 |
| 專利名稱 | 重組人胸腺肽α1在大腸桿菌中的表達(dá)純化和活性鑒定方法 |
| 主分類號(hào) | C12N15/12 |
| 分類號(hào) | C12N15/12;C12N15/16;C12N15/70;C07K1/14;C07K14/435;C07K14/575;C07H21/00;G01N33/68;G01N33/74 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 2004.6.4 CN 200410044915.9 |
| 申請(專利權(quán))人 | 南京大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 劉建寧;孫自勇;陳均勇;張 菁;吳 盛 |
| 地址 | 210093江蘇省南京市漢口路22號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 南京天華專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 夏 平 |
| 國省代碼 | 江蘇;32 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種重組人胸腺肽α1在大腸桿菌中的表達(dá)純化和活性鑒定方法，其特征在于：在DNA水平的重組人胸腺肽α1質(zhì)粒的構(gòu)建；目的基因在大腸桿菌系統(tǒng)中的表達(dá)；利用Zn-Sepharose親和層析柱對目標(biāo)蛋白的純化；以及使用胸腺細(xì)胞對重組人胸腺肽進(jìn)行體外活性鑒定。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及醫(yī)藥生物工程技術(shù)領(lǐng)域，是一種重組人胸腺肽α1在大腸桿菌中的表達(dá)純化和活性鑒定方法。本發(fā)明用PCR將化學(xué)合成的人胸腺肽α1基因擴(kuò)增并克隆到pMD18-T載體中，經(jīng)過KpnI/SacI酶切、連接將胸腺肽基因插入到表達(dá)載體pET32b中硫氧還蛋白下游。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至表達(dá)宿主BL21(DE3)中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，Zn-Sepharose親和層析純化以及復(fù)性處理，從每升菌液中可獲得35mg硫氧還蛋白-胸腺肽α1融合蛋白。經(jīng)凝血因子Xa酶切、Zn-Sepharose親和層析以及反向高效液相色譜純化獲得3.8mg重組人胸腺肽。小鼠胸腺細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)表明，重組人胸腺肽能顯著地抑制地賽米松誘導(dǎo)的小鼠胸腺細(xì)胞的凋亡，且該抑制作用與重組人胸腺肽的濃度呈劑量依賴關(guān)系。 |
| 國際公布 |
