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成年人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外擴(kuò)增和定向誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞的方法

公開(公告)號 CN1536076A  
公開(公告)日 2004.10.13  
申請(專利)號 CN03109287.X  
申請日期 2003.04.09  
專利名稱 成年人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外擴(kuò)增和定向誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞的方法  
主分類號 C12N5/08  
分類號 C12N5/08  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院野戰(zhàn)輸血研究所  
發(fā)明(設(shè)計)人 裴雪濤;牛麗麗;曹豐;賈國良;祝善俊  
地址 100850北京市海淀區(qū)太平路27號  
頒證日  
國際申請  
進(jìn)入國家日期  
專利代理機(jī)構(gòu)  
代理人  
國省代碼 北京;11  
主權(quán)項 一種分離擴(kuò)增培養(yǎng)成年人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymalstemcells,MSCs)的方法,其特征在于利用干細(xì)胞生理特性,采用DMEM-F12+10%胎牛血清作為基本培養(yǎng)基,通過及時、反復(fù)傳代對人MSCs進(jìn)行純化和擴(kuò)增培養(yǎng),從而獲得高純度大量MSCs的目的。  
摘要 本發(fā)明的目的是提供一種將人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)大量擴(kuò)增后體外定向誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞的方法。為實現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:1)利用MSCs的生物學(xué)特性,采用密度梯度離心法分離富集人MSCs,利用干細(xì)胞的自我更新和增殖特性對干細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增,從而達(dá)到獲得大量干細(xì)胞的目的。2)分離出的細(xì)胞在體外進(jìn)行定向誘導(dǎo)分化的方案,其特征在于特定培養(yǎng)代數(shù)(第2-6,11代細(xì)胞)進(jìn)行誘導(dǎo),以特定的化學(xué)誘導(dǎo)劑5-氮胞苷(5-AZA),特定濃度(5-10μM)進(jìn)行定向誘導(dǎo);3)分離出的細(xì)胞在體外進(jìn)行定向誘導(dǎo)分化的方案,其特征還在于bFGF促細(xì)胞增殖及促進(jìn)肌細(xì)胞表型表達(dá)功能與5-AZA的去甲基化作用結(jié)合,更有助于人MSCs向成心肌細(xì)胞定向分化。本發(fā)明提供了心肌細(xì)胞損傷缺失后的補(bǔ)充來源,為干細(xì)胞移植替代臨床治療心肌梗死及晚期心功能不全等奠定了基礎(chǔ),并為心肌梗死及晚期心功能不全等心肌疾病的藥物篩選提供了一個新的模型。  
國際公布  
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