| 公開(公告)號 | CN1477202A |
| 公開(公告)日 | 2004.02.25 |
| 申請(專利)號 | CN03115732.7 |
| 申請日期 | 2003.03.11 |
| 專利名稱 | 日本血吸蟲（中國大陸株)MFS4基因的克隆、表達(dá)和DNA疫苗 |
| 主分類號 | C12N15/30 |
| 分類號 | C12N15/30;C12N15/70;C12N15/79;A61K39/002 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海家畜寄生蟲病研究所;上海動(dòng)物生物技術(shù)研究中心 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 林矯矯;傅志強(qiáng);張亮;苑純秀 |
| 地址 | 200232上海市石龍路345弄3號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 上海新天專利代理有限公司 |
| 代理人 | 王巍 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種編碼日本血吸蟲(中國大陸株)MFS4基因的核苷酸序列，其特征在于它具有如下的核苷酸序列及相應(yīng)的氨基酸序列：gtatcatatc gttaacgcgc tccagttttg tttttgccca ggtattata atg gcg gtt 58Met Ala Val1ggt ggt cag aaa aag gtc act aaa ggg ggg aag aaa gga ggc aaa aag 106Gly Gly Gln Lys Lys Val Thr Lys Gly Gly Lys Lys Gly Gly Lys Lys5 10 15aaa acg gct gat cca ttc tct aaa aag gag tgg tat gat atc aag gct 154Lys Thr Ala Asp Pro Phe Ser Lys Lys Glu Trp Tyr Asp Ile Lys Ala20 25 30 35cca gct atg ttt cct aaa agg aca tgt gca aga acg ctt gtc aca cga 202Pro Ala Met Phe Pro Lys Arg Thr Cys Ala Arg Thr Leu Val Thr Arg40 45 50act cag ggt act cgc ata gcc agt gaa gca ctt aag ggt cgt gtt gtt 250Thr Gln Gly Thr Arg Ile Ala Ser Glu Ala Leu Lys Gly Arg Val Val55 60 65aca ctt agt ctt ggg gat ctg agc gaa aag aac gaa gaa gtc ttc cgt 298Thr Leu Ser Leu Gly Asp Leu Ser Glu Lys Asn Glu Glu Val Phe Arg70 75 80aaa ttc aag ctt caa atc gaa gat gtc cag ggg cgt cat tgt cta aca 346Lys Phe Lys Leu Gln Ile Glu Asp Val Gln Gly Arg His Cys Leu Thr85 90 95aat ttc cac gga tta gaa ctt act cga gac aaa cta tgt tca gtt gtt 394Asn Phe His Gly Leu Glu Leu Thr Arg Asp Lys Leu Cys Ser Val Val100 105 110 115gtt aag tgg cgg tca act ata gaa gcg cac gtc gac gtc aaa aca aca 442Val Lys Trp Arg Ser Thr Ile Glu Ala His Val Asp Val Lys Thr Thr120 125 130gat gga tac tta ctt cgt ttc ttt att atc acg ttc act cca agt gta 490Asp Gly Tyr Leu Leu Arg Phe Phe Ile Ile Thr Phe Thr Pro Ser Val135 140 145cca cgg tct gaa agg ctc cac tct tat gct cag acc aca cgc ata aaa 538Pro Arg Ser Glu Arg Leu His Ser Tyr Ala Gln Thr Thr Arg Ile Lys150 155 160cgg att cgc gct cgc ctt gtt gag ata atc cag caa gag gtt tct act 586Arg Ile Arg Ala Arg Leu Val Glu Ile Ile Gln Gln Glu Val Ser Thr165 170 175tgc gat ctg aaa gag gtc gtt aat aag ctt att cca gat tcc att gca 634Cys Asp Leu Lys Glu Val Val Asn Lys Leu Ile Pro Asp Ser Ile Ala180 185 190 195caa gac gct cga aaa gcg gca tca tgg ata tat cca cta ggt gag aca 682Gln Asp Ala Arg Lys Ala Ala Ser Trp Ile Tyr Pro Leu Gly Glu Thr200 205 210ttt atc cgc aaa gtt aag gtt tta aaa aga cca aaa gct gat ctc gct 730Phe Ile Arg Lys Val Lys Val Leu Lys Arg Pro Lys Ala Asp Leu Ala215 220 225cgg ctc atg gaa ctt cat ggt gaa tca aag tca act gcc cct ggt gag 778Arg Leu Met Glu Leu His Gly Glu Ser Lys Ser Thr Ala Pro Gly Glu230 235 240act gta tcc cgt cca gat cac tat gaa cct ccg |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及生物基因領(lǐng)域，具體涉及日本血吸蟲(中國大陸株)MFS4基因的基因序列、免疫篩選、在大腸桿菌中的表達(dá)、DNA疫苗的構(gòu)建及小鼠免疫保護(hù)試驗(yàn)。本發(fā)明基于我們對東方田鼠抗日本血吸蟲病機(jī)理研究的發(fā)現(xiàn)，用健康東方田鼠血清IgG3抗體免疫篩選日本血吸蟲成蟲cDNA文庫，獲得一個(gè)陽性克隆，用RACE技術(shù)擴(kuò)增出含ORF的基因。同源性序列分析表明其為一個(gè)新基因(MFS4)，開放閱讀框含780bp，編碼259個(gè)氨基酸。將MFS4基因亞克隆至原核表達(dá)質(zhì)粒pET28a(+)中，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET28a/MFS4，在BL21(DE3)表達(dá)菌中獲得高效表達(dá)，融合蛋白分子量約35kD，具有良好的抗原性；將該基因亞克隆至真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3中，構(gòu)建成重組質(zhì)粒pcDNA3/MFS4，制備DNA疫苗免疫昆明系小鼠，獲得28.6％的減蟲率、21.73％的減卵率。 |
| 國際公布 |
