| 公開(公告)號 | CN1453294A |
| 公開(公告)日 | 2003.11.05 |
| 申請(專利)號 | CN02117198.X |
| 申請日期 | 2002.04.25 |
| 專利名稱 | 一種眼鏡蛇神經(jīng)毒素蛋白的融合可溶表達(dá)、重組毒素的酸解釋放及其純化方法 |
| 主分類號 | C07K19/00 |
| 分類號 | C07K19/00;C12P21/02;C12N15/63 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國藥品生物制品檢定所 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 徐康森;王永保;劉兢 |
| 地址 | 100061北京市天壇西里2號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 北京元中知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 王明霞 |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種融和方式可溶表達(dá)眼鏡蛇神經(jīng)毒素蛋白、酸解釋放及其純化方法，其特征在于所述的方法包括：(1)神經(jīng)毒素基因的克隆；(2)可溶融合表達(dá)；(3)酸解；(4)酸解反應(yīng)完成后，加入Tris堿至50mM，酸解液pH被調(diào)節(jié)至7.0左右，經(jīng)電泳檢查酸解完全后，進(jìn)行凝膠柱純化；(5)重組蛋白主峰收集，真空冷凍濃縮，脫鹽，收集蛋白峰，測定重組蛋白濃度約為0.5mg/ml，重組神經(jīng)毒素的最終得率為35.3％(以滲透休克獲得量為1)；(6)重組神經(jīng)毒素的綜合得率純化步驟 得率 純度滲透休克 100％ 65％離子交換 82％ 90％酸解 63％ 28％凝膠過濾 76％脫鹽純品 91％ ＞95％最終得率 35.3％ |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種眼鏡蛇神經(jīng)毒素蛋白的融和可溶表達(dá)、重組神經(jīng)毒素的酸裂解釋放及其生產(chǎn)純化方法，包括天然毒素的理化性質(zhì)及序列的測定、神經(jīng)毒素基因的克隆和以融合方式的可溶表達(dá)、重組蛋白的融合位點(diǎn)的改造以及重組毒素的酸裂解釋放以及純化；采用本發(fā)明所述的用基因工程的方法表達(dá)生產(chǎn)重組神經(jīng)毒素可獲得大量可用于臨床的重組神經(jīng)毒素，可以使毒素的來源不受自然條件的制約。 |
| 國際公布 |
