| 公開(公告)號 | CN100338083C |
| 公開(公告)日 | 2007.09.19 |
| 申請(專利)號 | CN200510012809.7 |
| 申請日期 | 2005.09.13 |
| 專利名稱 | 組培誘導(dǎo)虎杖毛狀根制備虎杖苷的方法 |
| 主分類號 | C07H1/08(2006.01)I |
| 分類號 | C07H1/08(2006.01)I;A01H4/00(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 河北醫(yī)科大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 于樹宏;范慶書;查建蓬;張嫡群 |
| 地址 | 050017河北省石家莊市中山東路361號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 石家莊匯科專利商標事務(wù)所 |
| 代理人 | 王 琪;張梅申 |
| 國省代碼 | 河北;13 |
| 主權(quán)項 | 組培誘導(dǎo)虎杖毛狀根制備虎杖苷的方法，其特征在于：包括如下步驟： A.野生虎杖組培：選取發(fā)育良好的野生虎杖植株莖段頂部的幼芽，消毒處理后經(jīng)分化培養(yǎng)，壯苗培養(yǎng)，生根培養(yǎng)形成發(fā)育完整的幼苗，切取無菌組培苗的莖段、葉片、葉柄及幼芽外植體作為感染材料；其中誘導(dǎo)叢生芽分化的培養(yǎng)基是指MS+0.05mg/LTDZ+0.5mg/LNAA+0.1mg/L6-BA；壯苗生長的培養(yǎng)基是指MS+0.1mg/LCPPU+0mg/LNAA，生根培養(yǎng)基是指MS+0mg/LNAA+0.5％活性炭； B.發(fā)根農(nóng)桿菌的活化培養(yǎng)：取出冰箱保存的發(fā)根農(nóng)桿菌菌株ATCC11325平衡20～30min，然后在超凈工作臺上吸取500～800μl菌液于已滅菌的100～150ml新鮮YEB培養(yǎng)液中，于23～27℃、120～160rmin-1、黑暗振蕩培養(yǎng)20～24h； C.虎杖毛狀根的誘導(dǎo)培養(yǎng)：劃傷受體材料表面以形成傷口，放入步驟B的農(nóng)桿菌菌液中浸泡5sec～15min使之充分接觸，取出感染材料用無菌吸水紙輕輕蘸干多余菌液，24～27℃、黑暗條件下置于MS0中進行共培養(yǎng)7～15天； D.虎杖毛狀根優(yōu)化培養(yǎng)：經(jīng)分子鑒定后采用1/2MS0液體培養(yǎng)基，附加3％蔗糖作為碳源，在pH值為6.0～6.5，溫度22～27℃，搖床轉(zhuǎn)速：120～140rmin-1，在黑暗或弱光條件下6～30天獲得大量增殖的毛狀根株； E.虎杖毛狀根中虎杖苷的提取：從培養(yǎng)液中取出毛狀根、烘干、研磨成粉末，用體積比濃度為50％的乙醇結(jié)合30～40min超聲波處理進行提取，之后于3000r/min離心15～20min，取上清液減壓濃縮，再經(jīng)過柱層析分離、濃縮、結(jié)晶、冷凍干燥，得到純度較高的虎杖苷產(chǎn)品。 |
| 摘要 | 本發(fā)明提供一種利用組培技術(shù)和發(fā)根農(nóng)桿菌(Agrobacterium rhizogene)生根質(zhì)粒上的一段T-DNA對虎杖外植體進行遺傳轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)培養(yǎng)所產(chǎn)生的毛狀根來生產(chǎn)虎杖苷的方法。它包括如下步驟：A、野生虎杖組培；B、發(fā)根農(nóng)桿菌的活化培養(yǎng)；C、虎杖毛狀根的誘導(dǎo)培養(yǎng)；D、虎杖毛狀根優(yōu)化培養(yǎng)；E、虎杖毛狀根中虎杖苷的提取。本發(fā)明的技術(shù)進步效果表現(xiàn)在：與從野生虎杖根及根莖中提取虎杖苷和白藜蘆醇的現(xiàn)今生產(chǎn)方式相比，利用毛狀根來生產(chǎn)以根入藥為主的藥用植物的某些有效成分，具有生產(chǎn)周期短、質(zhì)量和產(chǎn)量穩(wěn)定、不占用耕地等優(yōu)點，而且天然藥物的生產(chǎn)是在可控和可重復(fù)條件下進行，不會受到病蟲害和自然環(huán)境等因素的影響。 |
| 國際公布 |
