引子2006年1月21日，來(lái)自北京中日友好醫(yī)院的最新消息，中國(guó)人用禽流感疫苗臨床研究進(jìn)展順利。截至目前，已有66名志愿者接種了試驗(yàn)用疫苗，均未出現(xiàn)明顯不適反應(yīng)。
疫苗的研制者之一北京科興生物制品有限公司表示，目前人用禽流感疫苗生產(chǎn)線(xiàn)已準(zhǔn)備完畢。在疫苗完成全部臨床試驗(yàn)后，或者在緊急情況下，經(jīng)國(guó)家有關(guān)部門(mén)批準(zhǔn)，該生產(chǎn)線(xiàn)可立即投入生產(chǎn)。如果發(fā)現(xiàn)禽流感病毒的變異，也可在48天內(nèi)完成對(duì)病毒的改造，并在4個(gè)月內(nèi)研制出新的疫苗。
專(zhuān)家認(rèn)為，這表明我國(guó)在人禽流感疫苗方面的科研水平已經(jīng)與全球一流水平同步。
關(guān)于這支疫苗的前世今生，故事則要從兩年前說(shuō)起。
越南－香港－英國(guó)
2004年1月17日。香港Marken快遞公司——該公司以快遞高危醫(yī)藥和病毒物品而蜚聲業(yè)界。
靜靜的快遞大廳里，預(yù)備出貨的箱子一一排列，其中一箱的封紙上寫(xiě)著，發(fā)件人地址：香港九龍南昌街三百八十二號(hào)。發(fā)件人：香港衛(wèi)生署林薇玲實(shí)驗(yàn)室（Dr. Wilina WL.Lim)。
沒(méi)有幾個(gè)人知道這個(gè)箱子的特殊之處——一株致命H5N1病毒匿身其中。
病毒取自一位12歲的越南女孩，女孩已逝。
時(shí)值2004年前后，越南爆發(fā)高致病性禽流感，引發(fā)全球關(guān)注。
WHO（世界衛(wèi)生組織)共有四個(gè)流感合作中心（WHO Collaborating Centres for Influenza)，分別在美國(guó)、英國(guó)、澳大利亞和日本。當(dāng)有緊急疫情爆發(fā)時(shí)，這些實(shí)驗(yàn)室會(huì)協(xié)助WHO的全球工作。按照WHO的工作流程，當(dāng)某地爆發(fā)流感疫情時(shí)，所在國(guó)的國(guó)家實(shí)驗(yàn)室將前往取樣調(diào)查，并將取樣數(shù)據(jù)、某些時(shí)候也包括病毒樣本本身，提交給WHO四個(gè)流感合作中心之一。
WHO八大參考實(shí)驗(yàn)室之一的林薇玲實(shí)驗(yàn)室，地處香港，靠近越南，病毒就這樣從越南被取回香港。
林薇玲，1997年香港流感大流行時(shí)進(jìn)行H5N1取樣和分離的主要專(zhuān)家，在控制傳染病和非傳染病方面成績(jī)卓著，曾被《新聞周刊》評(píng)為“21世紀(jì)女強(qiáng)人”。
這株剛剛殺死12歲越南女孩的病毒現(xiàn)在有了新的使命——為人類(lèi)研制人禽流感疫苗作貢獻(xiàn)。
為此，WHO的專(zhuān)家已經(jīng)召開(kāi)過(guò)遠(yuǎn)程電話(huà)會(huì)議，討論是否需要對(duì)H5N1病毒的部分基因片斷進(jìn)行修改，以提供更加安全的病毒樣本給疫苗生產(chǎn)商實(shí)驗(yàn)。當(dāng)時(shí)科學(xué)家們的意見(jiàn)不甚一致。
最終說(shuō)服科學(xué)家們立即開(kāi)始實(shí)驗(yàn)的還是病毒自己。
“病毒已經(jīng)發(fā)生了變化，它與之前的H5N1的抗體反應(yīng)都不同。”NIBSC的JohnWood博士依然清楚地記得當(dāng)初的情形。
在一次電話(huà)會(huì)議后，科學(xué)家們準(zhǔn)備開(kāi)始行動(dòng)：去掉H5N1基因鏈中高致病性的
氨基酸，降低H5N1的毒性，經(jīng)過(guò)重配后，再交與疫苗生產(chǎn)商實(shí)驗(yàn)。
JohnWood博士告訴記者，當(dāng)時(shí)具備科研能力能將越南女孩病毒樣本中高致病性病毒去除的機(jī)構(gòu)只有兩個(gè)：英國(guó)的NIBSC和美國(guó)St. Jude Research Hospital，Dr. Robert Webster的實(shí)驗(yàn)室。
美國(guó)實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)采用了另一個(gè)樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，制造了VNH5N1-PR8/CDC-RG禽流感疫苗生產(chǎn)用毒株，這也就是之后巴斯德公司用于生產(chǎn)并被美國(guó)政府采購(gòu)的疫苗生產(chǎn)用毒株。為避免實(shí)驗(yàn)的相同性，NIBSC則要求從林薇玲實(shí)驗(yàn)室提取越南女孩的病毒樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
我們的主角——一株令人聞名色變的H5N1病毒，現(xiàn)在該再次上路了。這可不是一般的快遞。
根據(jù)IATA（國(guó)際航空運(yùn)輸協(xié)會(huì)，International Air Transport Association)的標(biāo)準(zhǔn)，快遞公司人員必須為病毒準(zhǔn)備好能擰緊的有蓋小瓶，將其置于有干冰保護(hù)的泡沫箱中，再在外面套上一層泡沫防護(hù)箱。最外面的這個(gè)體積為0.5×0.5×0.5立方米的紙箱與常規(guī)的空運(yùn)物品沒(méi)有區(qū)別。只是物品的外包裝上具名：高危險(xiǎn)品，有傳染性。
快遞的包裝上還寫(xiě)著：目的地：Blanche Lane，South Mimms， Potters Bar，Hertfordshire EN6 3QG United Kingdom（英國(guó))。
收件人：NIBSC（National Institute for Biological Standards and Control. 國(guó)立生物制品標(biāo)準(zhǔn)和檢定研究所)， John Wood博士。
英國(guó)：病毒80日變身記
“那一天我們都在等待著病毒的到來(lái)�！�2004年1月19日，John Wood博士收到快遞。
病毒被直接送往NIBSC的P4實(shí)驗(yàn)室。在這個(gè)有300名工作人員，其中200名科學(xué)家的工作中心，一共9名人員參加了此次實(shí)驗(yàn)：其中3名科學(xué)家（Diane Major， Carolyn Nicholson，Jim Robertson)、4名技師和兩名高級(jí)科學(xué)家檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。其中一名高級(jí)科學(xué)家即是JohnWood博士。
“我們準(zhǔn)備好了實(shí)驗(yàn)室，檢驗(yàn)了每一臺(tái)設(shè)備是否運(yùn)作正常。”Diane Major，這位在此實(shí)驗(yàn)室流感小組工作28年的科學(xué)家在電話(huà)中回憶，正是她主要負(fù)責(zé)了病毒后期的安全測(cè)試。
這株可惡的病毒將在此經(jīng)受兩道處理流程：1.從高致病性禽流感病毒克隆出血凝素和神經(jīng)氨酸酶基因，并將其與其他基因重配產(chǎn)生新的毒種，該毒種必須不再具有高致病性并同時(shí)能在雞胚內(nèi)生存；2.檢驗(yàn)新產(chǎn)生的毒種的安全性，必須對(duì)于人和環(huán)境都絕對(duì)安全。
來(lái)自越南女孩的這株H5N1與其他高致病性病毒一樣，屬于RNA型病毒。
科學(xué)家們先通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄將RNA轉(zhuǎn)錄成DNA.獲得含有HA抗原和NA抗原的基因片段。其中的高致病性的基因即存在于HA抗原上。去掉其中4個(gè)氨基酸（3個(gè)
精氨酸，1個(gè)
賴(lài)氨酸)，并改變1個(gè)精氨酸為脯安酸之后，H5N1的高致病性便已去除。之后將含有HA抗原和NA抗原基因片段的質(zhì)粒與另外10個(gè)含有PR8基因片段的質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染VERO細(xì)胞，獲得了新的毒種。
現(xiàn)在，從香港過(guò)來(lái)的那株H5N1已經(jīng)被重配成了新的毒株，新毒株被命名為“NIBRG-14”。
接下來(lái)是檢驗(yàn)“NIBRG-14”的過(guò)程。在確定新毒種是否安全之前，它不能離開(kāi)NIBSC的P4實(shí)驗(yàn)室。
Major博士和她的同事們，對(duì)新的毒種實(shí)施了三項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)對(duì)象分別為：雞胚、小雞和雪貂。
第一個(gè)實(shí)驗(yàn)將NIBRG-14病毒直接注射到雞胚中，三天后，發(fā)現(xiàn)雞胚仍然存活。這就說(shuō)明，病毒能夠在雞胚中生長(zhǎng)而且并不會(huì)殺死胚胎。這與之前在越南發(fā)現(xiàn)的H5N1原病毒在兩天內(nèi)就殺死胚胎的情形是完全不一樣的。
第二個(gè)實(shí)驗(yàn)是將病毒原液注射到小雞的體內(nèi)。十天后觀察這些病毒是否有產(chǎn)生新的疾病或者是否讓小雞致死。十天后，小雞一切正常。
最后一個(gè)實(shí)驗(yàn)是在雪貂身上。因?yàn)榇朔N動(dòng)物的流感發(fā)病機(jī)理與人類(lèi)極其相似。如果這種病毒讓雪貂致命，那么毫無(wú)疑問(wèn)對(duì)人同樣具有致命性。注射N(xiāo)IBRG－14之后，雪貂的任何器官都無(wú)發(fā)病現(xiàn)象。
新毒株看來(lái)經(jīng)受住了檢驗(yàn)，是時(shí)候把它帶出P4實(shí)驗(yàn)室，提供給疫苗生產(chǎn)商了。
John Wood博士介紹，接受病毒的公司并不必為此病毒付費(fèi)，但必須簽署國(guó)際通用的“物質(zhì)轉(zhuǎn)讓協(xié)議”（MTA：Materials Transfer Agreement)。協(xié)議規(guī)定，疫苗生產(chǎn)商不得對(duì)實(shí)驗(yàn)樣本進(jìn)行科學(xué)的改造，只能在流感大流行時(shí)期才能使用，且所有實(shí)驗(yàn)室必須具備WHO所要求的實(shí)驗(yàn)規(guī)格。但實(shí)驗(yàn)一旦用于商業(yè)性生產(chǎn)，生產(chǎn)商須支付第三方費(fèi)用，具體數(shù)額尚待討論。
于是，距離H5N1病毒進(jìn)入NIBSC實(shí)驗(yàn)室80天后，病毒被重配為NIBRG-14，即將離開(kāi)NIBSC的實(shí)驗(yàn)室。
2004年4月8日之后，NIBRG-14們被發(fā)送往全球14個(gè)國(guó)家的50個(gè)實(shí)驗(yàn)室，其中有6家中國(guó)實(shí)驗(yàn)室。
中國(guó)70天：從“NIBRG-14”到疫苗
浙江天元生物藥業(yè)股份有限公司的陳先生記得他遇到John Wood博士是2005年2月，在WHO的會(huì)議上。“當(dāng)時(shí)他提到他們有這樣一種疫苗病毒種樣本，我們就向他申請(qǐng)索取�！边@位在公司負(fù)責(zé)科研開(kāi)發(fā)與品質(zhì)管理的負(fù)責(zé)人告訴記者。
NIBRG-14到達(dá)杭州的時(shí)間是2005年的8月。它靜靜地躺在天元生物的實(shí)驗(yàn)室里。
“HA和NA的基因序列告訴我們，它仍然是H5N1.”陳說(shuō)，我們一拿到該毒種就馬上開(kāi)始試驗(yàn)工作。
根據(jù)病毒學(xué)原理，純化后的病毒注射到人體內(nèi)，因其高致病性氨基酸已經(jīng)去除，因此不具備致病性；但這種病毒到達(dá)人體內(nèi)后，人體會(huì)自動(dòng)產(chǎn)生抗體�？v使抗體在人體內(nèi)滴度逐漸遞減，也會(huì)在人體再次遇到H5N1時(shí)，激活其記憶功能，產(chǎn)生抗體。
“我們要做的是一個(gè)病毒在雞胚細(xì)胞上適應(yīng)生長(zhǎng)、制備病毒、病毒純化、試制疫苗并檢驗(yàn)的過(guò)程。”陳解釋。
生產(chǎn)疫苗用的載體是雞胚。將毒種直接用注射器接種到孵化9到10天左右的雞胚尿囊腔中，利用其中的尿囊液進(jìn)行生長(zhǎng)。
48小時(shí)到72小時(shí)之后，收獲尿囊腔中的病毒液。收獲之后進(jìn)行“滅活”工作，用甲醛滅活毒種。
接下來(lái)“超濾濃縮”，即過(guò)濾去除大部分水和部分雜物，留下病毒。
然后是“超速離心”，將病毒顆粒再一次純化，只保留病毒顆粒。然后在病毒顆粒懸液中加入Triton X-100或者Triton N-101，去除病毒顆粒上的脂蛋白（脂蛋白在病毒疫苗中有副作用)。
去掉之后再次“超濾”，去掉Triton.隨后通過(guò)“凝膠層析”進(jìn)一步純化，保留病毒顆粒。
最后出來(lái)的溶液即可以配制成疫苗。臨床一般配制成為每人份15微克。裝在西林瓶或者預(yù)灌裝注射器中。經(jīng)過(guò)質(zhì)量檢定、貼上標(biāo)簽、包裝，即成為成型的疫苗。
經(jīng)過(guò)如此一系列復(fù)雜的流程，在70天左右，英國(guó)來(lái)客NIBRG-14在杭州變成了防止H5N1禽流感侵襲的疫苗。
天元公司生產(chǎn)出第一支疫苗的時(shí)間在2005年10月12日。
與此同時(shí)，在中國(guó)的另外一個(gè)公司也是在用同樣的毒本試制全病毒疫苗。2005年11月14日，北京科興公司“人用禽流感疫苗研制”獲得中國(guó)科技部驗(yàn)收成功。
2006年1月21日，已有66名志愿者接種了試驗(yàn)用疫苗，均未出現(xiàn)明顯不適反應(yīng)。
而現(xiàn)在科學(xué)家們的擔(dān)心是，如果流感大規(guī)模流行，疫苗是否有足夠的儲(chǔ)備量？
－－－－－－－－－－－請(qǐng)問(wèn)一下各位同道,國(guó)內(nèi)有沒(méi)有類(lèi)似于像上帖說(shuō)到的那家香港Marken快遞公司那樣,專(zhuān)門(mén)運(yùn)遞藥品或者藥水,醫(yī)療用品的郵遞公司?
望知道的同道能在此帖給予回復(fù)!謝謝!
