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免疫細(xì)胞化學(xué)在細(xì)菌學(xué)中的應(yīng)用

 

  一、甲組溶血性鏈球菌的快速檢查法

 。ㄒ)試劑制備

  用抗甲組溶血性鏈球菌的抗體,以FITC標(biāo)記,制成熒光抗體,再用C和G鏈球菌充分吸收;或用抗I型鏈球菌M蛋白成分的血清,標(biāo)記后吸收,都有可靠的特異性。

 。ǘ)檢查方法

 。1)以棉拭子擦拭患者咽部粘膜,取標(biāo)本。

 。2)將拭子浸入1ml肉湯小試管內(nèi),37℃培養(yǎng)2~3h。

 。3)取出棉拭了作分離培養(yǎng),常規(guī)鑒定。將肉湯液離心3~4min,3000r/min,棄上清,沉淀加0.01mol/l Ph7.2 PBS 洗滌,再離心沉淀,棄上清。

  (4)以沉淀涂片,直徑約1cm,涂兩個(gè)圓形區(qū)。

 。5)將標(biāo)本放入95%酒精中固定1min,然后浸入PBS中洗1次,取出室溫晾干。

 。6)直接法染色,左側(cè)標(biāo)本作對(duì)照,加非溶血性鏈球菌熒光抗體染色。右側(cè)加甲組溶血性鏈球菌熒光抗體染色。置濕盒中孵育20~30min,再用PBS洗2次,每次5min,振動(dòng)洗滌,濾紙吸干標(biāo)本周圍的水。

 。7)加緩沖甘油封裱,立即熒光顯微鏡觀察。

  免疫熒光檢出的陽性率較培養(yǎng)法為高,因?yàn)榍罢呖梢詸z出抗菌素治療后的死菌。二者符合率達(dá)95%。

  二、腦膜炎雙球菌的快速檢查法

  (一)制備熒光抗體

  可用多價(jià)和I、II、III、IV型單價(jià)的腦膜炎球菌抗血清,分別制備多價(jià)和單價(jià)熒光抗體。

 。ǘ)檢查方法

  用患者咽拭子,腦脊液或培養(yǎng)標(biāo)本制備涂片,晾干,火焰或乙醇固定,37中染色30min,熒光顯微鏡檢查。

  抗腦膜炎雙球菌的熒光抗體有很高的特異性,可以快速檢出和鑒定腦膜炎雙球菌。有人應(yīng)用免疫熒光檢查267例腦膜炎病人腦脊液中腦膜炎雙球菌,陽性率73.4%,培養(yǎng)和普通染色則只分別為41.9%和34.4%。

  三、霍亂弧菌和副霍亂弧菌的快速檢查法

  霍亂和副霍亂是嚴(yán)重的傳染病,快速診斷才能及早防治。取病人糞便標(biāo)本直接涂片熒光抗體染色檢查,與常規(guī)培養(yǎng)法比較,具有快速特異和檢出率很高的優(yōu)點(diǎn)。尤其適用于急性期病人的診斷。

  四、鼠疫桿菌的快速檢查法

  鼠疫是烈性傳染病,快速及時(shí)的診斷對(duì)于控制流行和救治病人有決定性意義,免疫熒光快速診斷方法是一種特異和敏感的手段。直接法和間接都可應(yīng)用,以直接法更簡便。

  五、炭疽桿菌的快速檢查法

  炭疽也是一種烈性傳染病,早期快速診斷對(duì)救治病人有決定性意義。免疫熒光檢查方法對(duì)炭疽桿菌的檢出率很高。應(yīng)用抗夾膜熒光抗體檢查炭疽桿菌有十分確定的診斷意義。也可用間接法檢測(cè)血清中抗夾膜抗體。

  六、致病性大腸桿菌的快速檢查法

  (1)制備當(dāng)?shù)爻R姷闹虏⌒源竽c桿菌熒光抗體。

  (2)取病人大便標(biāo)本或直腸拭子以生理鹽水?dāng)嚭屯科,晾干,火焰固定?/P>

 。3)直接法免疫熒光染色,立即熒光顯微鏡檢查。

  由于本菌較其他非致病性大腸桿菌組有特殊的抗原,不易發(fā)生強(qiáng)交叉反應(yīng)。所以,在兒童腸炎和引起人群暴發(fā)性腸炎時(shí)更準(zhǔn)確、快速和簡便。

  七、結(jié)核桿菌的快速診斷方法

  結(jié)核桿菌感染機(jī)體后可以誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體,可用間接法檢查血、胸腹水和腦脊液中的抗體。

  也可用抗結(jié)核桿菌的熒光抗體直接法檢查抗原。

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