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您現(xiàn)在的位置: 醫(yī)學(xué)全在線 > 理論教學(xué) > 基礎(chǔ)學(xué)科 > 免疫細(xì)胞與核酸分子雜交 > 正文:常用貯存液的配制
    

常用貯存液的配制

  1.30%丙烯酰胺溶液

  【配制方法】

  將29g丙烯酰胺和1g N,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中。加熱至37℃溶解之,補(bǔ)加水至終體積為100ml。用Nalgene濾器(0.45μm孔徑)過濾除菌,查證該溶液的pH值應(yīng)不大于7.0,置棕色瓶中保存于室溫。

  【注意】

  丙烯酰胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性并可以通過皮膚吸收,其作用具累積性。稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時(shí)應(yīng)戴手套和面具。可認(rèn)為聚丙烯酰胺無毒,但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作,因?yàn)樗可能會(huì)含有少量未聚合材料。

  一些價(jià)格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子,在丙烯酰胺貯存液中加入大約0.2體積的單床混合樹脂(MB-1Mallinckrodt),攪拌過夜,然后用Whatman 1號(hào)濾紙過濾以純化之。

  在貯存期間,丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會(huì)緩慢轉(zhuǎn)化成丙烯酰和雙丙烯酸。

  2.40%丙烯酰胺

  【配制方法】

  把380g丙烯酰胺(DNA測(cè)序級(jí))和20g N,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為600ml的蒸餾水中。繼續(xù)按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法處理,但加熱溶解后應(yīng)以蒸餾水補(bǔ)足至終體積為1L。

  【注意】

  見上述配制30%丙烯酰胺的說明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列測(cè)定。

  3.放線菌素D溶液

  【配制方法】

  把20mg放線菌素D溶解于4ml 100%乙醇中,1:10稀釋貯存液,用100%乙醇作空白對(duì)照讀取OD440值。放線菌素D(分子量為1255)純品在水溶液中的摩爾消化系數(shù)為21,900,故而1mg/ml的放線菌素D溶液在440nm處的吸光值為0.182,放線菌素D的貯存液應(yīng)放在包有箔片的試管中,保存于-20℃。

  【注意】

  放線菌素D是致畸劑和致癌劑,配制該溶液時(shí)必須戴手套并在通風(fēng)櫥內(nèi)操作,而不能在開放在實(shí)驗(yàn)桌面上進(jìn)行,謹(jǐn)防吸入藥粉或讓其接觸到眼睛或皮膚。

  藥廠提供的作治療用途的放線菌素D制品常含有糖或鹽等添加劑。只要通過測(cè)量貯存液在440nm波長處的光吸收確定放線菌素D的濃度,這類制品便可用于抑制自身引導(dǎo)作用。醫(yī)學(xué)全.在線提供

  4.0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液

  【配制方法】

  在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH調(diào)至pH值至7.0,用蒸餾水定容1ml,分裝成小份保存于-70℃

  5.10mol/L乙酸酰溶液

  【配制方法】

  把770g乙酸酰溶解于800ml水中,加水定容至1L后過濾除菌。

  6.10%過硫酸銨溶液

  【配制方法】

  把1g過硫酸銨溶解于終量為10ml的水溶液中,該溶液可在4℃保存數(shù)周。

  7.BCIP溶液

  【配制方法】

  把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二鈉鹽(BCIP)溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃

  8.2×BES緩沖鹽溶液

  【配制方法】

  用總體積90ml的蒸餾水溶解1.07g鹽溶液BES[N,N-雙(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4,室溫下用HCl調(diào)節(jié) 該溶液的pH值至6.96、然后加入蒸餾水定容至100ml,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成小份,保存于-20℃。

  9.1mol/L CaCl2溶液

  【配制方法】

  在200ml蒸餾水中溶解54g CaCl2·6H2O,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成10ml小份貯存于-20℃。

  【注意】

  制備感受態(tài)細(xì)胞時(shí),取出一小份解凍并用蒸餾水稀釋至100ml,用Nalgene濾器(0.45μm孔徑)過濾除菌,然后驟冷至0℃。

  10.2.5mol/L CaCl2溶液

  【配制方法】

  在20ml蒸餾水中溶解13.5g CaCl2·6H2O,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成1ml小份貯存于-20℃。

  11.1mol/L二硫蘇糖醇(DTT)溶液

  【配制方法】

  用20ml 0.01mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT,過濾除菌后分裝成1ml小份貯存于-20℃。

  【注意】

  DTT或含有DTT的溶液不能進(jìn)行高壓處理。

  12.脫氧核苷三磷酸(dNTP)溶液

  【配制方法】

  把每一種dNTP溶解于水至濃度各為100mmol/L左右,用微量移液器吸取0.05mol/l Tris堿分別調(diào)節(jié) 每一dNTP溶液的pH值7.0(用pH試紙檢測(cè)),把中和后的每種dNTP溶液各取一份作適當(dāng)稀釋,在下表中給出的波長下讀取光密度計(jì)算出每種dNTP的實(shí)際濃度,然后用水稀釋成終濃度為50mmol/L的dNTP,分裝成小份貯存于-70℃。

堿基

波長(nm)

消化系數(shù)(ε)[L/(mol·cm)]

A

259

1.54×104

G

253

1.37×104

C

271

9.10×103

T

260

7.40×103

  比色杯光徑為1cm時(shí),吸光度=εM

  13.0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液

  【配制方法】

  在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na·2H2O),在磁力攪拌器上劇烈攪拌,用NaOH調(diào)節(jié) 溶液的pH值至8.0(約需20g NaOH顆粒)然后定容至1L,分裝后高壓滅菌備用。

  【注意】

  EDTA二鈉鹽需加入NaOH將溶液的pH值調(diào)至接近8.0,才能完全溶解。

  14.溴化乙錠(10mg/ml溶液)

  【配制方法】

  在100ml水中加入1g溴化乙錠,磁力攪拌數(shù)小時(shí)以確保其完全溶解,然后用鋁箔包裹容器或轉(zhuǎn)移至棕色瓶中,保存于室溫。

  【注意】

  小心:溴化乙錠是強(qiáng)誘變劑并有中度毒性,使用含有這種染料的溶液時(shí)務(wù)必戴上手套,稱量染料時(shí)要戴面罩。

  15.2×HEPES緩沖鹽溶液

  【配制方法】

  用總量為90ml的蒸餾水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4·2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES,用0.5mol/l NaOH調(diào)節(jié) pH值至7.05,再用蒸餾水定容至100ml。用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成5ml小份,貯存于-20℃。

  16.IPTG溶液

  【配制方法】

  IPTG為異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量為238.3),在8ml蒸餾水中溶解2g IPTG后,用蒸餾水定容至10ml,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成1ml小份貯存于-20℃。

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