串聯(lián)親和純化技術(shù)(tandem afinity purification，TAP)是近年來發(fā)展的一種能夠快速研究生理?xiàng)l件下蛋白質(zhì)相互作用、揭示蛋白質(zhì)復(fù)合體相互作用網(wǎng)絡(luò)的新技術(shù)，如今已經(jīng)成為研究蛋白質(zhì)組學(xué)的一個(gè)被廣泛采納的工具。此技術(shù)使用特別設(shè)計(jì)的純化標(biāo)簽在非常接近于生理?xiàng)l件的情況下，能捕捉出特定的蛋白質(zhì)及其作用伙伴，借助于質(zhì)譜分析技術(shù)，研究人員即可鑒別出這種蛋白質(zhì)相互作用組。標(biāo)簽共分3部分：蛋白A、鈣調(diào)素結(jié)合多肽(calmodulin binding peptide。CBP)和中間連接的煙草病毒(TEV)蛋白酶識別的酶切位點(diǎn)。帶有TAP標(biāo)簽的融合蛋白在細(xì)胞中表達(dá)，且與醫(yī)學(xué)全.在線內(nèi)源相互作用蛋白形成復(fù)合物，細(xì)胞裂解后經(jīng)IsG偶聯(lián)的層析柱純化，蛋白A與IgG特異結(jié)合，從而使含有標(biāo)簽的復(fù)合物得到第一次純化。為除去與柱填料非特異結(jié)合的蛋白，用TEv酶切割分離蛋白A標(biāo)簽，使含有靶蛋白的復(fù)合物與層析柱分離，并經(jīng)過鈣調(diào)素偶聯(lián)的親和層析柱進(jìn)行第二次純化，靶蛋白上的CBP標(biāo)簽可與鈣調(diào)素結(jié)合；在加入過量螯合劑后CBP與親和層析柱分離使含有靶蛋白的復(fù)合體得到分離純化，經(jīng)十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS．PAGE)，復(fù)合物中的各個(gè)蛋白被分開，切膠、胰酶消化后，即可通過質(zhì)譜鑒定復(fù)合物中各個(gè)蛋白的氨基酸序列。該方法的優(yōu)點(diǎn)：(1)不需要過多的背景知識就可以得到大量含靶蛋白的復(fù)合體。(2)蛋白表達(dá)及與復(fù)合物的結(jié)合都接近生理水平。是一種檢測體內(nèi)蛋白相互作用的方法。(3)TAP采用兩步親和純化，提高了純化產(chǎn)物的特異性。
