尿液有形成分檢查是最常用的尿液常規(guī)檢查項目之一。UF-100流式尿液有形成分分析儀除能計數(shù)RBC、WBC數(shù)量外，還能給出紅細胞均一型、非均一型和混合型等實用信息，對沁尿系統(tǒng)疾病的診斷、鑒別血尿來源具有重要臨床應(yīng)用價值。但普遍存在的現(xiàn)狀是尿液從采集到用UF-100檢測，往往需要3-4h，甚至更長，我們在實際工作中發(fā)現(xiàn)尿液隨放置時間延長，RBC數(shù)量和形態(tài)會發(fā)生改變。本研究對尿液放置時間是否對RBC檢測信息產(chǎn)生影響進行試驗觀察。
一、材料與醫(yī)師招聘方法
1．材料：(1)標(biāo)本來源：選擇血尿標(biāo)本(UF-100測定RBC數(shù)>25/μl)359例。其中經(jīng)腎穿刺活檢、泌尿系統(tǒng)檢查及詳細病史確診為腎小球病變138例(包括急、慢性腎小球腎炎，腎功能不全，腎病綜合征，IrA腎炎等)，非腎小球疾病40例(包括尿路感染、輸尿管結(jié)石、泌尿系統(tǒng)腫瘤等)，泌尿系統(tǒng)出血原因待查181例。
(2)儀器：流式尿液有形成分分析儀UF-100(日本Sysmex公司制造)及配套試劑(稀釋液A5015、鞘液G6004、雙色熒光染料A6002)、質(zhì)控品uF-CHECK、Olympus普通光學(xué)顯微鏡和相差顯微鏡。
2．方法：(1)用Sysmex的質(zhì)控品對儀器進行室內(nèi)質(zhì)控測定，合格后進行常規(guī)標(biāo)本測定。(2)留取新鮮尿液30m1分置3個專用試管內(nèi)，充分混勻，室溫2O℃一25℃下檢測及存放。于即時、2h、4h時，分別對每份標(biāo)本進行測定。記錄RBC計數(shù)及各項參數(shù)結(jié)果。(3)留取新鮮尿液10ml于刻度離心管中，用標(biāo)準(zhǔn)離心機400×g離心5min，棄去上清尿。殘留0．2ml，搖勻，用相差顯微鏡觀察尿液紅細胞形態(tài)，計數(shù)變異RBC百分比。
3．統(tǒng)計學(xué)分析：采用SPSS11．5統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，應(yīng)用t檢驗，判斷標(biāo)本在室溫條件下放置時間對檢測RBC計數(shù)及其相關(guān)參數(shù)的影響。P<0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
二、結(jié)果
1．室溫條件下尿液放置時間對鑒別血尿來源結(jié)果的影響：以腎穿刺活檢和臨床綜合診斷結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，判斷腎病組和非腎病組尿液標(biāo)本在室溫條件下放置時間對檢測RBC變異型信息提示的影響，并計算敏感度和特異度，見表1（省略)。即刻、2h和4h診斷RBC變異型信息的敏感度分別為94．9％、85．5％和82．6％；特異度分別為82．5％、82．5％和70．0％．室溫條件下尿液放置時間對檢測RBC計數(shù)及其相關(guān)參數(shù)的影響：用UF-100測定359例標(biāo)本，根據(jù)RBC信息提示結(jié)果將標(biāo)本分為非均一型血尿組、混合型血尿組和均一型血尿組，分析尿液標(biāo)本在室溫條件下放置時間對UF-100檢測RBC計數(shù)及其相關(guān)參數(shù)的影響，見表2。
以新鮮尿液即時檢測結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)本在室溫條件下放置時間，對非均一型RBC組的影響較大，RBC計數(shù)結(jié)果在放置2h時就有改變，與即刻結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=4．49，P<0．01)；反映RBC橫截面積大小的P70-Fsc參數(shù)和RBC形態(tài)大小變異程度的Fsc-DW參數(shù)隨放置時間延長而降低；Non1ysedRBC％為未溶解RBC百分比，是指具有較高前向散射光強度的RBC比例，正常情況下儀器對NonlysedRBC％值的要求是不低于20％，否則判為檢測結(jié)果不可靠，需人工復(fù)檢，結(jié)果表明隨時間延長該值逐漸降低(t=13．11，P<0．01)，說明RBC在放置過程中有部分溶解和破壞。243例非均一型血尿組標(biāo)本即時檢測時只有1例NonlysedRBC％值<20％，放置2h時增至19例，NonlysedRBC％最低值為7．4％；放置4h時增加至20例，其中有4例Non-lysedRBC％值<5％，最低值為0．4％。混合型血尿組各參數(shù)的變化也有類似的表現(xiàn)，但其程度較非均一性組低。對均一型血尿組，除Fsc-DW參數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義外(t=3．31，P<0．05)外，其余參數(shù)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。提示放置時間對非均一型紅細胞的影響較均一型紅細胞更敏感。
三、討論
“腎小球性”與“非腎小球性”血尿的鑒別對各種泌尿系統(tǒng)疾病的診斷和治療具有十分重要的意義，因為二者的病因完全不同，采取進一步檢查和治療的原則亦不同。來源于腎小球的RBC在體內(nèi)因血管內(nèi)壓力而受損，在腎小管各段又受不同滲透壓和
pH值作用，紅細胞多為非均一型(大小不一、形態(tài)多樣、影紅細胞等)，容積變小，甚至有破裂。這些細胞在離體后隨放置時間延長，其數(shù)量和形態(tài)的變異性會因尿液滲透壓、pH值和溶質(zhì)成分的變化而進一步發(fā)生改變，另外細菌的大量繁殖也會促使其變化J，尿結(jié)晶形成的增多也會導(dǎo)致儀器誤認，以至于給出錯誤的信息。本實驗結(jié)果證實：UF-100對腎小球血尿診斷敏感度隨放置時間的延長有所下降，從即時檢測時的94．9％降為2h時的85．5％，4h時的82．6％。非腎小球來源的血尿，因其紅細胞未經(jīng)過腎小球濾膜擠壓損傷，在腎小管濾液中流經(jīng)的時間也短，受濾液、pH值和滲透壓變化的影響較小，因此紅細胞形態(tài)基本保持一致或變化較小，尿液排出后放置4h，其數(shù)量和形態(tài)的改變盡管不大，但也有12．5％(5／40)的RBC信息提示從均一型轉(zhuǎn)向混合型甚至非均一型，這部分標(biāo)本經(jīng)再次留取新鮮尿液復(fù)查，并結(jié)合相差顯微鏡檢查，其變異RBC％值<40％，證實為均一型RBC。
RBC Fsc-DW參數(shù)反映RBC形態(tài)大小和變異程度，當(dāng)大小不等、形狀不同的RBC增多時，F(xiàn)sc-DW值就變大，反之則變小。RBC均一型血尿組標(biāo)本在放置2h后，F(xiàn)sc-DW值逐漸升高，說明這時體系中RBC處于大小不一、形態(tài)不等的狀態(tài)，尤其是有菌尿和(或)結(jié)晶存在的情況下，尿中RBC更易變形，且體積往往變小，結(jié)晶的產(chǎn)生也常被儀器誤認，致使給出錯誤的RBC信息提示，這將直接導(dǎo)致臨床的誤診。有研究報道對于這些改變可以通過觀察RBC-MFL及RBC-FLDWSD參數(shù)值是否偏高來判斷儀器對RBC提示信息是否可靠，因為RBC沒有細胞核，熒光強度低，而細菌和結(jié)晶的熒光強度較RBC強。RBC非均一型血尿組組和混合型血尿組標(biāo)本在放置2h后，F(xiàn)sc-DW值逐漸降低，說明這時體系中RBC的變異性有所減少。我們對這部分標(biāo)本用相差顯微鏡觀察，有部分標(biāo)本的變異RBC數(shù)減低，新鮮尿液即時觀察時所見的變異型RBC(棘形、鋸齒形、環(huán)形、口形、裂形等)在室溫放置2h以后，有些消失不見，而出現(xiàn)較多影紅細胞、紅細胞碎片等，可能原因是尿液在存放過程中受多種因素的影響，如尿pH值、比重、利尿劑的應(yīng)用(尿液稀釋滲透壓過低)、尿素分解形成堿性尿等，致使變異的RBC部分溶解、破裂或釋出血紅蛋白而成為影紅細胞，有些輕微皺縮變形的紅細胞因腫脹而變成形態(tài)正常紅細胞，此時用儀器檢測，RBC的形態(tài)變異性減低，RBC計數(shù)結(jié)果降低，Non．1ysedRBC％值降低，RBC提示信息改變。
尿液標(biāo)本在室溫中放置，會造成UF-100對尿紅細胞提示信息改變、尿RBC參數(shù)改變，其中對非均一性RBC的影響較均一性RBC更敏感。鑒于此，使用UF-100檢測尿液RBC參數(shù)時，尿液必須新鮮，且在2h內(nèi)完成。按照多數(shù)醫(yī)院的工作規(guī)律，患者清晨6時留取晨尿，8時送至檢驗科，加上標(biāo)本檢測的前序工作，到上機檢測完畢，最快也要3～4h，這一問題不解決，會直接影響UF-100尿液RBC的檢測質(zhì)量。
