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1.2 試藥對照品
環(huán)丙沙星對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：130451-200302,含量：84.9%);阿昔洛韋對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：140630-200602, 供含量測定用);復(fù)方環(huán)昔滴眼液(醫(yī)院自制，批號：080818、080921、081014);甲醇、乙腈、三乙胺均為色譜純，其他試劑為分析純;水為注射用水。
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗
色譜柱：色譜柱：Kromasil C18 柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動相：甲醇-乙腈-0.05 mol·L-1枸櫞酸溶液(三乙胺調(diào)pH至3.5)，各組分比為15∶15∶70;檢測波長：253 nm;流速：0.8 mL·min-1;柱溫：室溫;進樣量：20 μL。在該色譜條件下，以圖1 A-C計算，阿昔洛韋和鹽酸環(huán)丙沙星的理論塔板數(shù)分別為3553和7241，兩者分離度為13.6。
圖1 高效液相色譜圖(略)
A 陰性樣品; B 對照品; C 樣品1 阿昔洛韋 2 鹽酸環(huán)丙沙星
2.2 溶液的配制
2.2.1 對照品溶液:分別精密稱取環(huán)丙沙星對照品35.6 mg和105 ℃干燥3 h后的阿昔洛韋對照品10.2 mg置同一100 mL量瓶中，加0.1 mol·L-1鹽酸溶液適量超聲至溶解，加稀釋溶劑甲醇-0.05 mol/L枸櫞酸溶液(20∶80)至刻度，搖勻，作為混合對照品儲備液，其中環(huán)丙沙星和阿昔洛韋濃度分別為0.302 mg·mL-1和0.102 mg·mL-1。精密吸取混合對照品儲備液5 mL置于25 mL量瓶中，加稀釋溶劑至刻度，搖勻，作為混合對照品溶液。
2.2.2 供試品溶液:精密吸取樣品1.0 mL置50 mL量瓶中，加稀釋溶劑至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
2.2.3 陰性樣品溶液:按處方比例制備不含鹽酸環(huán)丙沙星和阿昔洛韋的陰性樣品溶液，并按“2.2.2”項下方法操作，制成陰性樣品溶液醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站m.zxtf.net.cn。
2.3 標準曲線的制備
精密吸取“2.2.1”項下的混合對照品儲備液0.5,1.0,2.0,4.0,6.0,8.0 mL分置10 mL量瓶中，加稀釋溶劑稀釋至刻度，搖勻，即得混合對照品系列溶液。分別取上述溶液20 μL，依次注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以對照品的濃度C(μg·mL-1)為橫坐標，峰面積A為縱坐標，經(jīng)線性回歸，環(huán)丙沙星濃度在15.1～241.6 μg·mL-1范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，回歸方程為A=1.2048C+2.5342，(r=0.9993);阿昔洛韋濃度在5.1～81.6 μg·mL-1范圍內(nèi)有很好的線性關(guān)系，回歸方程為A=2.0784C-0.2306(r=0.9998)。
2.4 干擾試驗
取混合對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液在上述色譜條件下各進樣20 μL測定，記錄色譜圖，陰性樣品對測定無干擾，見圖1。
2.5 精密度試驗
精密吸取混合對照品溶液，連續(xù)進樣6次，測定峰面積，環(huán)丙沙星峰面積的RSD為0.63%，阿昔洛韋峰面積的RSD為0.41%(n=6)。
2.6 重復(fù)性試驗
取樣品(批號：081014)6份，按樣品測定方法測定，測得環(huán)丙沙星和阿昔洛韋含量的RSD分別為0.78%和0.67%。
2.7 穩(wěn)定性試驗
取供試品溶液，分別于0,2,4,6,8 h進樣20 μL后測定環(huán)丙沙星和阿昔洛韋的峰面積，RSD分別為0.68%和0.55%(n=6)。
2.8 加樣回收率試驗
