醫(yī)學(xué)免費(fèi)論文:快速篩選調(diào)節(jié)肝脂酶活性中藥成分方法的研究

人類(lèi)HL和脂蛋白脂肪酶(LPL)同屬于脂酶家族，然而卻是兩種不同性質(zhì)的酶。HL活性不需要ApoCⅡ和肝素激活作為激活劑，不受高鹽濃度及魚(yú)精蛋白的抑制，并且其底物特異性不高;而LPL活性目前只能在肝素化后進(jìn)行。因此，可以在高濃度鈉鹽而無(wú)肝素的反應(yīng)系統(tǒng)中直接用比色法測(cè)定肝脂酶活性[10]。

細(xì)胞分子靶標(biāo)是新藥研發(fā)的常見(jiàn)快速篩選模型。用HL建立影響HL活性的藥物篩選模型有望快速篩選到中藥活性成分。但由于制備純化HL的方法復(fù)雜，成本高，一般實(shí)驗(yàn)室難以用純化HL進(jìn)行大規(guī)模篩選實(shí)驗(yàn)。比色法是檢測(cè)大鼠肝勻漿HL活性水平的經(jīng)典方法[8-10]，為便于在HL分子靶標(biāo)水平篩選調(diào)節(jié)HL活性的藥物，本研究用大鼠肝勻漿和比色法測(cè)定HL活性，建立檢測(cè)HL活性的快速篩選模型。

研究表明大鼠肝組織勻漿制備的HL酶活性很高，而且較穩(wěn)定,在-70 ℃下保存其活性可維持穩(wěn)定1個(gè)月以上。在pH 9.5的磷酸鉀緩沖液中具有明顯的酶促動(dòng)力學(xué)特性，其HL脂解活性有明顯Ca2+依賴(lài)性，受鈣拮抗劑鹽酸異丙嗪的抑制并受表面活性劑SDS的抑制，符合文獻(xiàn)純化HL的酶促動(dòng)力學(xué)特性[1,11]。本研究結(jié)果顯示,大鼠肝組織勻漿中HL酶豐富，制備方法簡(jiǎn)單易行，成本很低,配合成熟的脂酶活性比色法檢測(cè)，可用于快速篩選影響HL酶活性的中藥調(diào)脂活性成分，并從有效方藥組分中篩選得到有增強(qiáng)和抑制HL活性的組分。首次實(shí)驗(yàn)證明,使用大鼠肝組織勻漿和脂酶比色測(cè)定HL活性是快速篩選影響HL活性中藥活性成分的靈敏、穩(wěn)定、可靠的方法。

復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂方(FTZ)對(duì)飲食性高脂血癥模型大鼠能使其降低的肝組織和血漿中HL活性恢復(fù)至正常水平[7]。本研究還從FTZ的成分中篩選得到有明顯增強(qiáng)HL酶活性的HL激活劑人參皂苷Rb2和齊墩果酸，其可能是復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂方提升飲食性高脂血癥大鼠肝組織肝脂酶(HL)活性的物質(zhì)基礎(chǔ)之一。

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