龜齡集－人參皂苷Rg1的測(cè)定－薄層掃描法 2

本方法采用薄層掃描法測(cè)定龜齡集中人參皂苷Rg₁的含量。

本方法適用于龜齡集中人參皂苷Rg1含量的測(cè)定。

供試品于索氏提取器中，加乙醚加熱回流，揮盡殘?jiān)�中的乙醚，加甲醇回流提取，提取液回收甲醇至干，殘�(jiān)�用正丁醇飽和的水溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取合并提取液，用氫氧化鈉溶液洗滌，再用正丁醇飽和的水洗至中性，棄去水洗液，回收正丁醇至干，殘?jiān)�用適量乙醇溶解，加在中性氧化鋁－D₁₀₁型大孔吸附樹脂柱上，用乙醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)�用適量甲醇溶解，制成供試液，點(diǎn)樣、展開，以10%硫酸乙醇溶液顯色，用薄層掃描儀進(jìn)行掃描，于波長(zhǎng)λs=541nm， λ_R=700nm測(cè)量人參皂苷 Rg₁（C₄₂H₇₂O₁₄)吸收度積分值，計(jì)算其含量。

1. 乙醚

2 .甲醇

3 .正丁醇

4 .氫氧化鈉

5 .乙醇 70％

6 .氯仿

7 .硫酸 10％硫酸乙醇溶液

1 儀器

1.1索氏提取器

1.2薄層掃描儀

1.3涂布器

應(yīng)能使吸附劑在玻璃板上手工或自動(dòng)涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

1.4點(diǎn)樣器

一般采用微升毛細(xì)管或與之相應(yīng)的點(diǎn)樣器材。

1.5展開室

可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部平底或雙槽，蓋子須密閉。

2 材料

2.1玻板

用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。

2.2吸附劑

硅膠G，其顆粒大小一般要求直徑為10～40μm。

2.3 D101型大孔吸附樹脂

2.4中性氧化鋁

1. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取人參皂著Rg₁對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

取供試品 20粒的內(nèi)容物，精密稱取，求出每粒重量，混勻，精密稱取約 2.5g，置索氏提取器中，加乙醚 60mL，加熱回流提取至回流提取液近無色，棄去乙醚液，揮盡殘?jiān)�中的乙醚，加甲�?70mL，加熱回流提取至回流提取液近無色，將提取液回收甲醇至干，殘?jiān)�用正丁醇飽和的�?15mL溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15mL，合并提取液，用1％氫氧化鈉溶液洗滌3次（15mL、15mL、10mL)，再用正丁醇飽和的水洗至中性，棄去水洗液，回收正丁醇至干，殘?jiān)�用適量70%乙醇溶解，加在中性氧化鋁－D₁₀₁型大孔吸附樹脂柱（內(nèi)徑1cm，下層：D₁₀₁型大孔吸附樹脂，高7cm；上層：中性氧化鋁，100～120目，高 3cm)上，用 70%乙醇 80mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)�用適量甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至 2mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

1. 薄層板制備

將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.25～0.5mm)取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺(tái)上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應(yīng)均勻，平整，無麻點(diǎn)、無氣泡、無破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，或用商品預(yù)制板。

2. 點(diǎn)樣

精密吸取供試品溶液 10μL、對(duì)照品溶液 2μL與 4μL，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，如用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣到薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。

3. 展開

將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，以氯仿－甲醇－水（13：7：2)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，取出。

4.含量測(cè)定

在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，選擇反射方式，采用吸收法，進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)：λs=541nm， λ_R=700nm， 測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算。

用外標(biāo)法測(cè)定時(shí)，若對(duì)照品各數(shù)據(jù)點(diǎn)在校正曲線上呈一通過原點(diǎn)的直線時(shí)，可用一點(diǎn)法校正，如不通過原點(diǎn)通常宜采用二點(diǎn)法校正，必要時(shí)用多點(diǎn)法校正。

中華人民共和國藥典，國家藥典委員會(huì)編、化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，一部p.476。