藿膽丸－豬去氧膽酸和鵝去氧膽酸的測定－薄層掃描法

本方法采用薄層掃描法測定藿膽丸中豬去氧膽酸和鵝去氧膽酸的含量。

本方法適用于霍膽丸中豬去氧膽酸和鵝去氧膽酸含量的測定。

供試品置電高壓滅菌鍋內(nèi)皂化，冷卻，濾過，離心，取上清液，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值，用氯仿振搖提取，合并氯仿提取液，加無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液回收氯仿至干，殘渣加無水乙醇使溶解，制成供試液，點樣、展開，以5％硫酸乙醇溶液顯色，用薄層掃描儀進行熒光掃描，于激發(fā)波長λ=366 nm測量豬去氧膽酸（C₂₉H₄₀O₄)和鵝去氧膽酸（C₂₄H₄₀O₄)熒光強度的積分值，計算其含量。

1. 乙醚

2 .氫氧化鈉

3 .氯仿

4 .無水硫酸鈉

5 .無水乙醇

6 .正己烷

7 .醋酸

8 .醋酸乙酯

9 .甲醇

10. 硫酸 5％硫酸乙醇溶液

11 .乙醇

12 .鹽酸

1 儀器

1.1電高壓滅菌鍋

1.2薄層掃描儀

1.3涂布器

應能使吸附劑在玻璃板上手工或自動涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

1.4點樣器

一般采用微升毛細管或與之相應的點樣器材。

1.5展開室

可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部平底或雙槽，蓋子須密閉。

2 材料

2.1玻板

用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。

2.2吸附劑

硅膠G，其顆粒大小一般要求直徑為10～40μm。

1. 對照品溶液的制備

精密稱取豬去氧膽酸、鵝去氧膽酸對照品適量，分別加無水乙醇制成每1mL含0.2mg的溶液，作為對照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

精密稱取供試品細粉約1g，置錐形瓶中，加入40%氫氧化鈉溶液20mL，搖勻，置電高壓滅菌鍋內(nèi)，在 120℃皂化 5小時，冷卻，濾過，藥渣用水洗滌 3次，每次 20mL，離心，取上清液，合并三次離心液，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至約1，用氯仿振搖提取4次（40mL、40mL、30mL、30mL)，合并氯仿提取液，加無水硫酸鈉脫水，濾過，用氯仿30mL分次洗滌無水硫酸鈉及濾器，洗液并入濾液，回收氯仿至干，殘渣加無水乙醇使溶解，置 25mL量瓶中，用適量無水乙醇洗滌容器，洗液并入量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應準確至所稱取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。

1. 薄層板制備

將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動涂布器進行涂布（厚度為0.25～0.5mm)取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應均勻，平整，無麻點、無氣泡、無破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，或用商品預制板。

2 .點樣

精密吸取供試品溶液2μL、上述兩種對照品溶液各1μL與4μL，分別交叉點于同一硅膠G薄層板上，如用點樣器點樣到薄層板上，一般為圓點，點樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點直徑一般不大于2mm，點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。

3. 展開

將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，以正己烷－醋酸乙酯－醋酸－甲醇（20：25：2：3)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％硫酸乙醇溶液，于100℃加熱至斑點顯色清晰，取出。

4.含量測定

在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，選擇反射方式，進行熒光掃描，激發(fā)波長：λ=366 nm， 測量供試品熒光強度的積分值與對照品熒光強度的積分值，計算。

用外標法測定時，若對照品各數(shù)據(jù)點在校正曲線上呈一通過原點的直線時，可用一點法校正，如不通過原點通常宜采用二點法校正，必要時用多點法校正。

中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編、化學工業(yè)出版社，2005年版，一部p.663。