附子—烏頭堿、新烏頭堿和次烏頭堿的含量測(cè)定方法—HPLC-UV-1

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方法名稱(chēng)：	附子—烏頭堿、新烏頭堿和次烏頭堿的含量測(cè)定—HPLC-UV-1
應(yīng)用范圍：	用于附子中烏頭堿、新烏頭堿和次烏頭堿的含量測(cè)定
方法原理：	本品粉末用10%氨水浸潤(rùn)，用乙醚超聲提取，經(jīng)液相色譜儀分離，在230nm處測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算含量。
儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)條件：	儀器設(shè)備 Agilent1100 高效液相色譜儀(在線(xiàn)脫氣機(jī)、四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、VWD 檢測(cè)器) 色譜條件 Zorbax Eclipse XDB C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相：A （40mmol乙酸銨緩沖液)-B（乙腈)，梯度洗脫:0～15min，33 %B，15～45 min，33%～50%B；流速：1.0mL·min^-1，檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm。
試樣制備：	對(duì)照品溶液的制備　精密稱(chēng)取新烏頭堿、烏頭堿和次烏頭堿對(duì)照品適量，加0.01%鹽酸-甲醇制成每1mL含新烏頭堿223μg、烏頭堿79μg和次烏頭堿209μg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。供試品溶液的制備　取生附片粉末(過(guò)40目篩) 1g，精密稱(chēng)定，置錐形瓶中，加10%氨水1mL浸潤(rùn)，再精密加入乙醚25mL，超聲提取30min，吸取上清液，殘?jiān)靡颐严礈?次，每次5mL，合并提取與洗滌的乙醚液，50℃水浴揮干乙醚，用0.01%鹽酸-甲醇10mL溶解，過(guò)0.45μm濾膜，取續(xù)濾液作為生品供試液。取附子各種炮制品粉末(過(guò)40目篩) 2g，精密稱(chēng)定，置錐形瓶中，加10%氨水2mL浸潤(rùn)，再精密加入乙醚50mL，超聲提取30min，吸取上清液，殘?jiān)靡颐严礈?次，每次10mL，合并提取與洗滌的乙醚液，50℃水浴揮干乙醚，用0.01 %鹽酸-甲醇2mL溶解，過(guò)0.45μm 濾膜，取續(xù)濾液作為炮制品供試液。
操作步驟：	分別精密量取對(duì)照品溶液和各供試品溶液20μL，注入液相色譜儀，在上述色譜條件下，測(cè)定峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量。
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備注：
參考文獻(xiàn)：	劉芳，于向紅，李飛等. HPLC測(cè)定附子及其炮制品中3種雙酯型生物堿的含量．中國(guó)中藥雜志．2006，14（31)：1160～1162