| 公開(公告)號(hào) | CN1935996A |
| 公開(公告)日 | 2007.03.28 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200510017151.9 |
| 申請(qǐng)日期 | 2005.09.21 |
| 專利名稱 | H9亞型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白 |
| 主分類號(hào) | C12N15/09(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N15/09(2006.01)I;C12N15/13(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C07K16/18(2006.01)I;G01N33/53(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 金寧一 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 金寧一;徐一鳴;魯會(huì)軍;李 昌;韓 松;金擴(kuò)世 |
| 地址 | 130062吉林省長(zhǎng)春市青龍路1068號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 吉林長(zhǎng)春新紀(jì)元專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 白冬冬 |
| 國(guó)省代碼 | 吉林;22 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種H9亞型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白的制備方法，其特征在于： 首先構(gòu)建質(zhì)粒pPIC9K-H9HA：將pMD18-TH9HA質(zhì)粒由BamH I、HindIII雙酶切，經(jīng)補(bǔ)平后回收得到目的片段；pPIC9K質(zhì)粒由EcoR I線性化，兩端分別補(bǔ)平、去磷后回收；將以上回收產(chǎn)物經(jīng)T4連接酶連接后即獲得目的質(zhì)粒pPIC9K-H9HA。 然后進(jìn)行H9HA蛋白真核表達(dá)及制備：用SacI線性化pPIC9K-H9HA重組質(zhì)粒；線性化后將其電轉(zhuǎn)化至GS115感受態(tài)中，在MD平板中培養(yǎng)，而后挑取單個(gè)菌落于YPD培養(yǎng)基中復(fù)蘇，提重組體基因組進(jìn)行PCR鑒定，篩選出的陽(yáng)性菌株于BMGY培養(yǎng)基中搖菌，離心后轉(zhuǎn)至BMMY培養(yǎng)基中開始甲醇誘導(dǎo)，產(chǎn)物離心后取上清，加入飽和硫酸銨沉淀蛋白，收集蛋白進(jìn)行進(jìn)一步純化即得到H9HA抗原蛋白。 |
| 摘要 | 一種H9亞型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白的制備方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種AIV亞型抗原蛋白——H9HA蛋白。本發(fā)明提供一種AIV關(guān)鍵的抗原蛋白H9亞型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白。本發(fā)明首先構(gòu)建質(zhì)粒pPIC9K-H9HA，然后進(jìn)行H9HA蛋白真核表達(dá)及制備即得到H9HA抗原蛋白。本發(fā)明開展了利用畢赤酵母真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)制備用于HPAIV ELISA快速檢測(cè)的抗原蛋白的研究。以H9HA為研究對(duì)象，成功獲得了針對(duì)H9HA抗體的抗原蛋白，經(jīng)SDS-PAGE、間接ELISA檢測(cè)，具良好生物活性。其表達(dá)量高、特異性強(qiáng)、易于純化、具有完整的空間構(gòu)象等特點(diǎn)完全符合ELISA快速檢測(cè)試劑盒的鑒定要求。 |
| 國(guó)際公布 |
