| 公開(公告)號(hào) | CN1316042C |
| 公開(公告)日 | 2007.05.16 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200510031487.0 |
| 申請(qǐng)日期 | 2005.04.26 |
| 專利名稱 | 基因mRNA的定量檢測(cè)系統(tǒng)和檢測(cè)方法 |
| 主分類號(hào) | C12Q1/68(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12Q1/68(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 湖南大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 王柯敏;譚蔚泓;劉 斌;李 軍;王 煒 |
| 地址 | 410082湖南省長(zhǎng)沙市河西岳麓山湖南大學(xué)化學(xué)生物傳感與計(jì)量學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 湖南兆弘專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 趙 洪 |
| 國(guó)省代碼 | 湖南;43 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種基因mRNA表達(dá)定量檢測(cè)方法，其特征在于基因表達(dá)定量檢測(cè)的步驟為：(1).構(gòu)建分子信標(biāo)與RNA標(biāo)準(zhǔn)品雜交的熒光標(biāo)準(zhǔn)曲線：利用T7體外轉(zhuǎn)錄試劑盒通過(guò)體外轉(zhuǎn)錄技術(shù)合成與分子信標(biāo)探針互補(bǔ)的靶RNA分子，取過(guò)量的分子信標(biāo)與不同濃度的靶RNA分子在雜交緩沖液中混合，在37℃溫育4～6小時(shí)，檢測(cè)并記錄雜交前后熒光強(qiáng)度的變化，以體外合成的靶RNA濃度為橫坐標(biāo)，以分子信標(biāo)與RNA雜交后的熒光信號(hào)變化值為縱坐標(biāo)作圖，建立RNA濃度與熒光信號(hào)變化的雜交標(biāo)準(zhǔn)曲線；(2).提取不同材料的總RNA并定量測(cè)定后，在10mM Tris-HCl，pH 8.0，3mM MgCl2雜交緩沖液中加入濃度為25nM的分子信標(biāo)、一定量樣品總RNA，在37℃溫育，檢測(cè)并記錄熒光強(qiáng)度的變化；(3).利用建立的雜交熒光標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出與雜交后的熒光信號(hào)變化值對(duì)應(yīng)的靶RNA濃度，以每微克樣品含靶RNA的摩爾數(shù)表示。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種基因mRNA表達(dá)水平定量檢測(cè)的分析技術(shù)。該檢測(cè)系統(tǒng)由標(biāo)準(zhǔn)品RNA，分子信標(biāo)核酸探針和RNA檢測(cè)樣品在相應(yīng)的雜交緩沖溶液中組成。本檢測(cè)技術(shù)能定量檢測(cè)經(jīng)基因轉(zhuǎn)染、藥物處理、基因干擾等各種處理的細(xì)胞或組織樣品的基因表達(dá)水平，在生命科學(xué)與醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域具有重要的科學(xué)實(shí)用價(jià)值和廣闊的市場(chǎng)前景。 |
| 國(guó)際公布 |
