| 公開(公告)號 | CN1624147A |
| 公開(公告)日 | 2005.06.08 |
| 申請(專利)號 | CN200310118223.X |
| 申請日期 | 2003.12.05 |
| 專利名稱 | 一種有效提高基因定點轉換（突變/修復)的新方法 |
| 主分類號 | C12N15/90 |
| 分類號 | C12N15/90;C12N15/09;C12N15/82;C12N5/06;C12N5/10 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 中國醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所;香港大學 |
| 發(fā)明(設計)人 | 劉德培;吳雪松;辛立;殷文璇;黃建東;謝賞恩;梁植權 |
| 地址 | 100005北京市東單三條5號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 北京紀凱知識產權代理有限公司 |
| 代理人 | 程偉 |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權項 | 一種提高細胞內基因定點轉換的方法，包括：針對靶位點設計合成轉換用寡核苷酸分子；將寡核苷酸分子與轉染試劑混合，形成轉染復合物；使生長期細胞與有效抑制DNA合成濃度的抑制劑接觸，使染色體DNA的復制叉處于阻滯狀態(tài)；將轉染復合物與所述的染色體DNA的復制叉被阻滯的細胞共孵育；進入細胞的單鏈寡核苷酸通過同源互補與靶序列相互作用，完成靶位點的定點轉換。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種細胞內基因操作技術，利用DNA合成阻滯劑——胸苷(thymidine)可以將傳統(tǒng)單鏈寡核苷酸介導的基因定點轉換(修復/突變)的效率顯著提高。目前應用本發(fā)明所獲得的最佳結果是將效率提高到原先傳統(tǒng)方法的約10倍水平。本發(fā)明通過胸苷降低復制叉移動速度，使靶基因在復制叉部位長時間以單鏈形式存在，為單鏈寡核苷酸與靶序列發(fā)生互補配對進而完成靶位點的轉換(修復/突變)人為地創(chuàng)造了條件。本發(fā)明所獲得的結果可以有效提高基因定點轉換技術在各個領域的應用性，包括動植物遺傳育種、病毒微生物的功能轉化，人類點突變遺傳病的基因治療，以及在功能基因組學研究中對單核苷酸多態(tài)性的研究方法等。本發(fā)明同時提供了一種構建基因定點轉換研究的報告系統(tǒng)的方法，以及由此方法獲得的一株細胞系，該系統(tǒng)在檢測、評估基因定點轉換效果方面具有優(yōu)越性。 |
| 國際公布 |
