酵母菌表達系統(tǒng)中表達人卵透明帶ZP3蛋白的方法
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公開(公告)號
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CN1194094C
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公開(公告)日
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2005.03.23
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申請(專利)號
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CN03113968.X
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申請日期
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2003.03.21
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專利名稱
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酵母菌表達系統(tǒng)中表達人卵透明帶ZP3蛋白的方法
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主分類號
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C12N15/81
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分類號
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C12N15/81;C07K14/435
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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暨南大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計)人
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謝琪璇;潘善培
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地址
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510632 廣東省廣州市天河區(qū)黃埔大道西601號
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頒證日
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國際申請
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進入國家日期
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專利代理機構(gòu)
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廣州華進聯(lián)合專利商標代理有限公司
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代理人
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王東亮
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國省代碼
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廣東;44
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主權(quán)項
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一種酵母菌表達系統(tǒng)中表達人卵透明帶ZP3蛋白的方法，采用受體菌GS115、目的蛋白基因及載體質(zhì)粒、線性化酶等；包括的步驟有擴增目的蛋白的基因片段、重組質(zhì)粒的構(gòu)建、重組質(zhì)粒的篩選和鑒定、重組質(zhì)粒導(dǎo)入Pichiapastoris表達系統(tǒng)、重組子(工程菌)的篩選、重組蛋白的表達、重組蛋白的純化，其特征是：所述目的蛋白基因是23～408位氨基酸的基因片段；所述的載體質(zhì)粒是pPIC9k；所述重組質(zhì)粒構(gòu)建時，插入該載體質(zhì)粒的ZP3目的基因片段是在前面引入了6個組氨酸序列的ZP323～408位氨基酸序列的基因片段；所述的重組質(zhì)粒導(dǎo)入前，先將重組質(zhì)粒用SacI酶進行線性化，然后從酵母基因組的AoxI基因處插入。
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摘要
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本發(fā)明公開了一種酵母菌表達系統(tǒng)中表達人卵透明帶ZP3蛋白的方法，載體質(zhì)粒為pPIC9k，目的蛋白選用了23～408位氨基酸，串聯(lián)組氨酸序列片段連在目的蛋白的N末端，導(dǎo)入前采用SacI酶對重組質(zhì)粒進行線性化。表達生成的ZP3蛋白分泌及溶解性好，便于應(yīng)用。
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國際公布
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