| 公開(公告)號(hào) | CN1508265A |
| 公開(公告)日 | 2004.06.30 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN02155058.1 |
| 申請(qǐng)日期 | 2002.12.20 |
| 專利名稱 | 白細(xì)胞介素－2及其基因在戒毒應(yīng)用中的測(cè)試方法 |
| 主分類號(hào) | C12Q1/68 |
| 分類號(hào) | C12Q1/68;G01N33/68;A61K48/00;A61K38/20;A61P25/36 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 劉新恒;顧錦法;王晉慧;姚明忠 |
| 地址 | 200031上海市岳陽(yáng)路319號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 上海新天專利代理有限公司 |
| 代理人 | 王巍 |
| 國(guó)省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 白細(xì)胞介素-2IL-2及其基因在戒毒應(yīng)用中的測(cè)試方法，其特征在于該方法包括下列步驟：(1)真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3-IL-2的構(gòu)建人IL-2基因經(jīng)EcoRI和XhoI酶切得到有EcoRI和XhoI接頭的全長(zhǎng)含信號(hào)肽的人IL-2 cDNA 462bp克隆入經(jīng)相同酶切的pcDNA3載體Invitrogen，IL-2基因在CMV啟動(dòng)子的控制下表達(dá)，構(gòu)建的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌JM109擴(kuò)增，堿裂解法制備質(zhì)粒，聚乙二醇沉淀法純化，通過(guò)測(cè)定260nm的光吸收來(lái)確定質(zhì)粒濃度，注射時(shí)質(zhì)粒稀釋于含5％葡萄糖的磷酸緩沖液中；(2)重組腺病毒Ad5-IL-2的構(gòu)建人IL-2基因經(jīng)EcoRI和XhoI酶切得到有EcoRI和XhoI接頭的全長(zhǎng)含信號(hào)肽的人IL-2 cDNA 462bp克隆入經(jīng)相同酶切的pCA13載體Microbix，得到pCA13-IL-2，此時(shí)IL-2基因在CMV啟動(dòng)子的控制下表達(dá)，pCA13-IL-2與腺病毒基因組質(zhì)粒pBHG10 Microbix共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞，進(jìn)行同源重組，篩選重組腺病毒，擴(kuò)增純化腺病毒，注射時(shí)病毒稀釋于含5％蔗糖的PBS中；(3)嗎啡依賴小鼠模型的建立以劑量遞增法形成嗎啡依賴小鼠模型，此組小鼠為嗎啡依賴組，嗎啡依賴小鼠腹腔注射納洛酮4mg.kg-1可激發(fā)戒斷癥狀，此組小鼠為嗎啡戒斷組；(4)嗎啡依賴大鼠模型的建立以劑量遞增法形成嗎啡依賴大鼠模型，此組大鼠為嗎啡依賴組，嗎啡依賴大鼠腹腔注射納洛酮4mg.kg-1可激發(fā)戒斷癥狀，此組大鼠為嗎啡戒斷組；(5)IL-2蛋白及pcDNA3質(zhì)粒介導(dǎo)IL-2基因抑制小鼠嗎啡戒斷癥狀測(cè)試方法的建立用劑量遞增法建立的嗎啡成癮小鼠模型，在末次給嗎啡3小時(shí)后，將成癮的小鼠隨機(jī)分為8組，每組10只，蛋白治療組：經(jīng)第52 |
| 摘要 | 本發(fā)明屬基因工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明公開了一種白細(xì)胞介素-2(IL-2)及其基因在戒毒應(yīng)用中的測(cè)試方法。通過(guò)本發(fā)明的方法表明蛛網(wǎng)膜下腔注射IL-2蛋白有較好的戒毒作用，其效果呈劑量依賴性。pcDNA3-IL-2基因也有一定的戒毒作用，通過(guò)對(duì)該基因?qū)霔l件的進(jìn)一步優(yōu)化，其戒毒效果可望更好，更適合實(shí)際實(shí)用。 |
| 國(guó)際公布 |
