| 公開(公告)號 | CN101096385A |
| 公開(公告)日 | 2008.01.02 |
| 申請(專利)號 | CN200710009084.5 |
| 申請日期 | 2007.06.08 |
| 專利名稱 | 抗氧化及預防糖尿病發(fā)生的融合蛋白的制備方法及其應用 |
| 主分類號 | C07K19/00(2006.01)I |
| 分類號 | C07K19/00(2006.01)I;C12N15/09(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;A61K38/16(2006.01)I;A61P3/10(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 廈門大學 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 周克夫;李俊燕 |
| 地址 | 361005福建省廈門市思明南路422號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 廈門南強之路專利事務所 |
| 代理人 | 馬應森 |
| 國省代碼 | 福建;35 |
| 主權(quán)項 | 抗氧化及預防糖尿病發(fā)生的融合蛋白的制備方法，其特征在于其包括以下步驟： 1)根據(jù)ProTα的基因序列，設(shè)計上游引物P1和下游引物P2，上游引物P1和下游引物P2分別為： 上游引物P1：5’GCGGATCCATGTCAGACGCAGCCGTA-3’， 下游引物P2：5’GCGAATCCCTAGTCATCCTCGTCGGTC-3’， 將上游引物P1引入BamHI酶切位點，將下游引物P2引入EcoRI酶切位點； 2)采用RT-PCR方法獲得前胸腺素α原全長基因cDNA，將PCR產(chǎn)物純化后與pMD18-TVector連接，重組載體命名為TP，轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細胞，將鑒定的陽性菌液測序； 3)采用生物學軟件DNAman對7個單克隆基因序列和參考的proTα的基因序列進行比對； 4)用EcoRI和BamHI雙酶切ProTαPCR產(chǎn)物，將ProTα基因片斷插入經(jīng)同樣雙酶切的原核表達載體pGEX 6P-1中，命名為PP，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，獲得轉(zhuǎn)基因BL21菌株，在LB培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)，加入IPTG，37℃誘導表達，菌液離心后的沉淀用上樣緩沖液溶解，沸水浴后離心取上清，進行SDS-PAGE電泳，獲得融合蛋白。 |
| 摘要 | 抗氧化及預防糖尿病發(fā)生的融合蛋白的制備方法，涉及一種融合蛋白。根據(jù)ProTα的基因序列，設(shè)計上下游引物P1和P2，將P1引入BamHI酶切位點，將P2引入EcoR I酶切位點。采用RT-PCR方法得前胸腺素α原全長基因cDNA，將PCR產(chǎn)物純化后與pMD18-T Vector連接，轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細胞，對7個單克隆基因序列和參考的proTα的基因序列比對。用EcoRI和BamHI雙酶切ProTαPCR產(chǎn)物，將ProTα基因片斷插入經(jīng)同樣雙酶切的原核表達載體pGEX 6P-1中，轉(zhuǎn)化大腸桿菌得轉(zhuǎn)基因BL21菌株，培養(yǎng)后加入IPTG誘導表達，菌液離心后的沉淀用上樣緩沖液溶解，離心取上清電泳。 |
| 國際公布 |
