| 公開(公告)號(hào) | CN101096384A |
| 公開(公告)日 | 2008.01.02 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200710009083.0 |
| 申請(qǐng)日期 | 2007.06.08 |
| 專利名稱 | 一種抗腫瘤融合蛋白的制備方法及其應(yīng)用 |
| 主分類號(hào) | C07K19/00(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C07K19/00(2006.01)I;C12N15/09(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;A61K38/16(2006.01)I;A61K39/00(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 廈門大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 周克夫;李俊燕 |
| 地址 | 361005福建省廈門市思明南路422號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 廈門南強(qiáng)之路專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 馬應(yīng)森 |
| 國(guó)省代碼 | 福建;35 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種抗腫瘤融合蛋白的制備方法，其特征在于其包括以下步驟： 1)根據(jù)ProTα的基因序列，設(shè)計(jì)上游引物P1和下游引物P2，上游引物P1和下游引物P2分別為： 上游引物P1：5’-GCGGATCCATGTCAGACGCAGCCGTA-3’， 下游引物P2：5’-GCGAATCCCTAGTCATCCTCGTCGGTC-3’， 將上游引物P1引入BamHI酶切位點(diǎn)，將下游引物P2引入EcoRI酶切位點(diǎn)； 2)采用RT-PCR方法獲得前胸腺素α原全長(zhǎng)基因cDNA，將PCR產(chǎn)物純化后與pMD18-TVector連接，重組載體命名為TP，轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞，將鑒定的陽(yáng)性菌液測(cè)序； 3)采用生物學(xué)軟件DNAman對(duì)7個(gè)單克隆基因序列和參考的proTα的基因序列進(jìn)行比對(duì)； 4)用EcoRI和BamHI雙酶切ProTαPCR產(chǎn)物，將ProTα基因片斷插入經(jīng)同樣雙酶切的原核表達(dá)載體pGEX 6P-1中，命名為PP，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，LB培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)，加入IPTG，37℃誘導(dǎo)表達(dá)，菌液離心后的沉淀用上樣緩沖液溶解，沸水浴后離心取上清，進(jìn)行SDS-PAGE電泳，獲得GST-Proα融合蛋白； 5)將4經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)化的轉(zhuǎn)基因BL21菌株超聲破碎后，離心所獲得的上清中含有可溶性的融合蛋白GST-Proα； 6)將上清經(jīng)過(guò)GST親和層析柱分離純化獲得高純度的GST-Proα融合蛋白。 |
| 摘要 | 一種抗腫瘤融合蛋白的制備方法及其應(yīng)用，涉及一種融合蛋白。根據(jù)ProTα的基因序列，設(shè)計(jì)上下游引物P1和P2，P1引入BamHI酶切位點(diǎn)，P2引入EcoR I酶切位點(diǎn)。用RT-PCR方法得前胸腺素α原全長(zhǎng)基因cDNA，PCR產(chǎn)物純化后與pMD18-T Vector連接，轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞，對(duì)7個(gè)單克隆基因序列和參考的proTα的基因序列比對(duì)。用EcoRI和BamHI雙酶切ProTαPCR產(chǎn)物，將ProTα基因片斷插入經(jīng)同樣雙酶切的原核表達(dá)載體pGEX 6P-1中，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，加入IPTG，誘導(dǎo)表達(dá)，菌液離心后的沉淀用上樣緩沖液溶解，離心取上清電泳，得GST-Proα融合蛋白。 |
| 國(guó)際公布 |
