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關(guān)鍵詞：沙苑
【摘要】 目的 探討沙苑子及其復(fù)方制劑對(duì)小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用。方法 二級(jí)昆明小鼠174只，雌雄各半，體重18～22g，隨機(jī)分3組。用沙苑子及其復(fù)方制劑給小鼠灌胃15d后活殺，用稱重法測(cè)量臟器系數(shù)；用足跖厚度增加法評(píng)價(jià)細(xì)胞免疫功能；用溶血空斑法評(píng)價(jià)體液免疫功能；用腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的方法評(píng)價(jià)巨噬細(xì)胞吞噬功能。結(jié)果 沙苑子能明顯提高小鼠DTH反應(yīng)程度；巨噬細(xì)胞吞噬功能明顯增強(qiáng)；溶血空斑數(shù)明顯增多；白細(xì)胞介素-1、6、8(IL-1、6、8)水平增高，與對(duì)照組比較具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 沙苑子具有調(diào)節(jié)小鼠免疫功能的作用。
【關(guān)鍵詞】 沙苑子；免疫功能；小鼠
The effect of flatstem milkvetch seed and its compound preparation on
regulation of immunological function of mice
【Abstract】 Objective To investigate the effect of flatstem milkvetch seed and its compound preparation on the regulation of immunological function of mice.Methods One hundred seventy four of second order Kunming mice(weight 18～22g)，male and female each occupying one half，were randomly divided into three groups.All the mice were sacrificed after they had been given flatstem milkvetch seed and its compound preparation in intragastric administration for fifteen days.The organ’s index of mice was calculated by determining the organ’s weight and the cell immunity were evaluated by determining the thickening of pedis.Hemolytic plaque test was used to appraise humoral immunity，and peritoneal macrophage swallowing chicken red blood cell test was used to appraise the phagocytes function.Results Compared with the control group，the DTH reaction and phagocytes function were improved obviously(P＜0.05)，and the quantity of hemolytic plaque and the concentration of IL-1，IL-6，IL-8 were increased significantly(P＜0.05) in flatstem milkvetch seed and its compound preparation group.The spleen and thymus index had no statistic difference among all the groups.Conclusion Flatstem milkvetch seed can regulate the immunological function of mice.
【Key words】 flatstem milkvetch seed；immunological function；mice
沙苑子(Semen astragali complanati)為豆科植物扁莖黃芪(Astragulus complanatus R.Br)的干燥成熟種子�，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，沙苑子含有豐富的硒、銅、鐵、鋅、錳及脂肪油、鞣質(zhì)、維生素A等成分，具有養(yǎng)肝明目、強(qiáng)腰健骨、滋潤(rùn)肌膚等功效［1］。筆者通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物IL-1、6、8，胸腺及脾臟重量指數(shù)等免疫指標(biāo)測(cè)定，探討沙苑子對(duì)小鼠調(diào)節(jié)免疫功能的生物作用。
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 二級(jí)昆明小鼠174只，雌雄各半，體重18～22g，購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(動(dòng)物合格證號(hào)：BDW95007)。
1.2 受試藥物 沙苑子水煎劑，含生藥量200mg/ml；復(fù)方沙苑子由沙苑子、玄駒、紅景天、北五味子、枸杞子、麥冬、川芎等水煮提取組成，含生藥量400mg/ml。均由本所制劑室配制。沙苑子產(chǎn)于陜西，螞蟻為廣西產(chǎn)雙齒多刺蟻(Polyrhachis dives smith)，其他中藥材均購(gòu)自北京康玉藥店。
1.3 試劑 綿羊紅細(xì)胞由采自健康成年綿羊血制備，豚鼠血清由衛(wèi)生部環(huán)境衛(wèi)生監(jiān)測(cè)所毒理室提供，雞紅細(xì)胞采自健康成年來(lái)杭雄雞血制備，其余為國(guó)產(chǎn)分析或優(yōu)級(jí)純?cè)噭?BR>
1.4 儀器 放免計(jì)數(shù)儀為上海產(chǎn)SN-682型。
1.5 實(shí)驗(yàn)方法 將174只小鼠按體重編號(hào)后，用隨機(jī)表分成4大組，分別進(jìn)行巨噬細(xì)胞吞噬功能實(shí)驗(yàn)、溶血空斑實(shí)驗(yàn)、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、測(cè)定胸腺、脾臟指數(shù)實(shí)驗(yàn)。每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物又分為沙苑子組、復(fù)方沙苑子組和生理鹽水對(duì)照組，各組均為12只小鼠。沙苑子組、復(fù)方沙苑子組分別用沙苑子、復(fù)方沙苑子水煎劑0.5ml灌胃，每日1次；生理鹽水對(duì)照組同時(shí)用等量的生理鹽水灌胃，連續(xù)15天。
1.5.1 巨噬細(xì)胞吞噬功能的實(shí)驗(yàn) 按照文獻(xiàn)［2］方法，末次給藥后，給每只小鼠腹腔注射2%雞紅細(xì)胞懸液1ml。間隔30min，頸椎脫臼處死，仰位固定于鼠板上。正中剪開(kāi)腹壁皮膚，經(jīng)腹膜注入生理鹽水2ml，轉(zhuǎn)動(dòng)鼠板1min。然后吸出腹腔洗液1ml，平均分滴于兩片載玻片上，放入墊有濕紗布的搪瓷盒內(nèi)，移置37℃孵箱溫育30min。孵畢，于生理鹽水中漂洗，以除去未貼片細(xì)胞。晾干，以1：1丙酮-甲醇溶液固定。4%(V/V)Giemsa-磷酸緩沖液染色3min，用蒸餾水漂潔，晾干，在油鏡下計(jì)數(shù)巨噬細(xì)胞，每片200個(gè)，按下式計(jì)算吞噬百分率和吞噬指數(shù)：
吞噬百分率=吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)〖〗200個(gè)巨噬細(xì)胞×100%
1.5.2 溶血空斑實(shí)驗(yàn) 應(yīng)用溶血空斑實(shí)驗(yàn)進(jìn)行抗體生成細(xì)胞檢測(cè)［2］。取羊血，用生理鹽水洗滌3次，每只鼠經(jīng)腹腔注射SRBC 1×108個(gè)。將用SRBC免疫5天后的小鼠處死，取脾，制成細(xì)胞懸液。將表層培養(yǎng)基加熱溶解后與等量雙倍的Hanks液混合，分裝小試管，每管0.5ml，再向管內(nèi)加0.5μl體積分?jǐn)?shù)為10%的SRBC(用SA液配制)、10μl脾懸液，迅速混合后傾倒于已刷瓊脂糖薄層的玻片上，待瓊脂凝固后，將玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培養(yǎng)箱中溫育1.5h，然后將用SA緩沖液稀釋的補(bǔ)體(1：5)加入到玻片架凹槽內(nèi)，繼續(xù)培養(yǎng)1.5h后計(jì)數(shù)溶血空斑數(shù)，以空斑數(shù)代表分泌抗體的細(xì)胞數(shù)。
1.5.3 遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng) 采用足底增厚法進(jìn)行DTH檢測(cè)［3］。給小鼠腹腔注射1%SRBC 0.1ml/每鼠，將其致敏，4天后測(cè)量左后足跖部厚度，然后在測(cè)量部位皮下注射體積分?jǐn)?shù)為20%的SRBC(20μl/每鼠)，注射后24h測(cè)量左后足跖部厚度，同一部位測(cè)量3次，取平均值。以注射前后足跖厚度的差值，表示DTH的程度。
1.5.4 對(duì)小鼠胸腺、脾臟指數(shù)的影響 末次前稱其體重，給藥30min斷頭處死，立即取出，稱量脾臟、胸腺濕重，計(jì)算其指數(shù)。計(jì)算公式如下：
脾(胸腺)指數(shù)=脾(胸腺)重量(g)
體重(g)
1.5.5 沙苑子對(duì)小鼠血清IL-1、6、8水平的影響 將上述30只小鼠按上述方法分組給藥，按文獻(xiàn)［4］的方法，末次給藥后，30min斷頭取血，3000r/min離心10min分離血清，取足量血清待測(cè)。
1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 計(jì)量數(shù)據(jù)均用SAS軟件進(jìn)行方差分析。
2 結(jié)果
2.1 沙苑子對(duì)小鼠3項(xiàng)免疫功能的影響 結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 沙苑子對(duì)小鼠3項(xiàng)免疫功能的影響 (x±s)
注：與生理鹽水對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01；用藥組比較#P＜0.05
表1數(shù)據(jù)表明，小鼠服用沙苑子及其復(fù)方制劑，能明顯增強(qiáng)小鼠吞噬雞紅細(xì)胞的能力；增加小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)。尤其是復(fù)方沙苑子組與對(duì)照組比較，具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)沙苑子與復(fù)方沙苑子比較，前者更能增加抗體生成細(xì)胞數(shù)。用藥組與對(duì)照組比較DTH明顯增強(qiáng)，具有明顯提高小鼠細(xì)胞免疫功能的作用，具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
2.2 對(duì)小鼠胸腺、脾臟指數(shù)的變化 結(jié)果見(jiàn)表2。
2.3 沙苑子對(duì)小鼠血清IL-1、6、8水平的影響 結(jié)果見(jiàn)表3。
表2 沙苑子對(duì)小鼠胸腺、脾臟重量與指數(shù)的影響 (x±s)
注：結(jié)果顯示各用藥組小鼠與對(duì)照組小鼠比較胸腺與脾臟以及其指數(shù)差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。
表3 沙苑子對(duì)免疫實(shí)驗(yàn)小鼠血清IL-1、6、8的影響 (x±s)
注：與對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01
從表3可以看出，用藥組血清IL-1、6、8水平明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)，特別是沙苑子對(duì)IL-1、復(fù)方制劑對(duì)IL-1、8水平的影響較對(duì)照組尤為顯著(P＜0.01)，差異具有顯著性。
3 討論
從20世紀(jì)80年代起，不少學(xué)者對(duì)沙苑子進(jìn)行了較為集中的研究，現(xiàn)代藥理研究證實(shí)，沙苑子可以調(diào)節(jié)血液流變學(xué)、血壓和腦血流量，具有明顯的保肝、降脂、抗疲勞等作用，并能提高免疫功能［4］。機(jī)體對(duì)抗原物質(zhì)的免疫應(yīng)答，是由免疫系統(tǒng)中各免疫細(xì)胞(包括巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞等)相互協(xié)調(diào)、共同完成的［5］。PFC是反映抗體生成細(xì)胞水平的指標(biāo)之一，它的完成需上述各項(xiàng)免疫細(xì)胞的協(xié)調(diào)作用，本文中經(jīng)沙苑子作用后，小鼠對(duì)SRBC的免疫應(yīng)答能力明顯提高，從表1結(jié)果可以看出，用藥組小鼠形成的溶血空斑數(shù)明顯高于對(duì)照組，即產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞數(shù)明顯增多。DTH是反應(yīng)T細(xì)胞功能的指標(biāo)之一，實(shí)驗(yàn)中用藥組小鼠的足跖腫脹度明顯高于對(duì)照組，說(shuō)明沙苑子具有增強(qiáng)機(jī)體的特異性細(xì)胞免疫功能的作用。巨噬細(xì)胞是一具有多種功能的免疫細(xì)胞，在機(jī)體非特異性免疫、體液免疫以及腫瘤免疫方面起著重要的作用［6，7］。沙苑子及其復(fù)方制劑，能使小鼠的巨噬細(xì)胞吞噬功能明顯增強(qiáng)，與對(duì)照組小鼠比較差異顯著。
白細(xì)胞介素是一類具有重要生物活性的免疫細(xì)胞因子，IL-1主要由單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，在細(xì)胞免疫激活中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。IL-6是一種來(lái)源于單核巨噬淋巴細(xì)胞以及非淋巴細(xì)胞類產(chǎn)生的多功能細(xì)胞因子。除參與機(jī)體的抗感染防御機(jī)制外，還與某些腫瘤和自身免疫病的發(fā)生和轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)。IL-8對(duì)特異和非特異性的免疫反應(yīng)細(xì)胞具有強(qiáng)烈的趨化作用。因此，機(jī)體IL-1、6、8含量下降，必然造成機(jī)體免疫功能低下［8］。本文研究表明，服用沙苑子及其復(fù)方制劑的小鼠，其IL-1、6、8水平與對(duì)照組比較明顯升高。因此，通過(guò)本文各項(xiàng)指標(biāo)實(shí)驗(yàn)分析表明，沙苑子及其復(fù)方制劑有增強(qiáng)小鼠免疫功能的作用。
1 李國(guó)坤.沙苑子的神奇療效.家庭中醫(yī)藥，2003，12：99.
2 徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué).北京：人民衛(wèi)生出版社，1985，936-937；946-948.
3 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)，第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1993，738；920-923.
4 李昌勤.沙苑子化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2000，11(11)：1041-1042.
5 徐月清，曹志然，李立萍，等.靈芝對(duì)小鼠免疫功能調(diào)節(jié)作用的研究.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理，1999，16(1)：18-21.
6 戴玲，王華，陳彥.白頭翁糖蛋白對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞免疫的增強(qiáng)作用.中國(guó)生化藥物雜志，2000，21(5)：230-231.
7 陳陽(yáng)述，余宙耀，張海松，等.胎牛骨髓多肽對(duì)小鼠和人巨噬細(xì)胞以及NK活性的影響.上海免疫學(xué)雜志，1996，16：357.
8 辛益妹，王忠，谷順才，等.蘆薈對(duì)缺氧與疲勞應(yīng)激小鼠血清白細(xì)胞介素-1、6、8含量的影響.航空軍醫(yī)，2003，31(1)：18-20.
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