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1.血紅蛋白量：ICSH，1978年，1996年。NCCLS和ICSH均推薦的參考方法，測定溶解紅細胞中血紅蛋白轉(zhuǎn)化成氰化高鐵血紅蛋白的吸光度。
2.血細胞壓積：ICSH，1980年，2001年。ICSH參考方法采用Wintrobe管，糾正殘留血漿。NCCLS采用微量管，不糾正殘留血漿。因為在口徑小的試管中殘留血漿少，兩者之間差約1%左右。
3.白細胞分類計數(shù)：NCCLS，1992年。NCCLS白細胞分類參考方法H20-A，用Romanowsky染色，鏡下分析400個白細胞。
4.紅細胞計數(shù)，ICSH，1994年。紅細胞計數(shù)參考方法用特定的半自動血細胞計數(shù)儀，測定固定容量的顆粒數(shù)（利用Coulter ZBI的電子細胞計數(shù)儀符合該標準）。用等滲緩沖生理鹽水作1/50000倍稀釋，測量和糾正重合誤差。
單通道計數(shù)儀，能用于檢測通過小孔的紅細胞、白細胞，小孔為100µm和70µm，其長度：直徑比率為1。用水平壓力計控制稀釋細胞懸液的流量為1ml，與脈沖分析儀連接，設置閾值下限，微型計算機采集數(shù)據(jù)糾正重合誤差。對于新鮮血和乳膠顆粒重復測定精度可達0.35%。
5.白細胞計數(shù)：ICSH，1994年。用Coulter ZBI法計數(shù)。只作一次稀釋，加入Zapoglobin后在1-5分鐘內(nèi)計數(shù)。
6.血小板計數(shù)：ICSH，2001年。用流式細胞儀法，間接法計數(shù)血小板。采用EDTA抗凝全血，加特異性熒光標單抗（CD41和CD61）染色血小板，被染色血小板在流式細胞儀上根據(jù)熒光強度和散射光，得出PLT和RBC比率，通過準確計數(shù)RBC，就可算得準確的血小板值。計數(shù)至少50000個血小板，精度可達2%。用血細胞計數(shù)盤直接計數(shù)血小板的方法，因為計數(shù)盤誤差為1%，若計數(shù)500個血小板，精度為5%。
目前，穩(wěn)定參考品仍然未定。ACD或CPD抗凝血液可作為控制品，室間質(zhì)評樣品和短期校準品。因只能穩(wěn)定數(shù)周，不符合國際參考標準的基本性能。另一方面，固定血細胞能穩(wěn)定數(shù)年，但其密度、變形性、形態(tài)和流變性能會影響它們在計數(shù)系統(tǒng)中的行為，需形狀因子糾正才能與新鮮血有可比性。“形狀因子”主要影響紅細胞，新鮮紅細胞在通過計數(shù)系統(tǒng)時，呈紡錘形，而固定紅細胞呈銅錢形。但是，計數(shù)系統(tǒng)中，新鮮白細胞和血小板保持球形，固定也不影響形態(tài)，其形狀因子為1.0。穩(wěn)定膠乳顆粒有同樣的局限性，優(yōu)點是可根據(jù)顆粒的特定大小生產(chǎn)單一的顆粒，且標準差極小。ICSH和歐盟參考BCR標準局建立了3批特別精度的膠乳顆粒，在顯微鏡下，用經(jīng)校準標尺測得直徑分別為2.23,4.8和9.445µm,呈球形，計算體積為5.8,58和441fL，此物質(zhì)能直接溯源到一級長度計量標準。在顆粒計數(shù)儀中，形狀因子由真實體積和測定體積的差異得出。結(jié)果見表2。
表2 參考儀器和常規(guī)儀器的形狀因子計算
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計算體積（fL） |
參考儀器（fL） |
常規(guī)儀器（fL） |
形狀因子（fL） |
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5.8 |
5.74 |
5.67 |
1.0 |
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58 |
76 |
76 |
1.3 |
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441 |
超出范圍 |
超出范圍 |
理論上，膠乳制劑能用于校準一級參考儀器，然后用于新鮮血液或穩(wěn)定血液的定值。以此調(diào)節(jié)所有計數(shù)儀，給出可比結(jié)果，所用校準品必須溯源到一級參考標準。國際上，測量結(jié)果的溯源鏈模式如下圖左(圖略)。在血液細胞計數(shù)方面，生產(chǎn)廠家的校準品溯源鏈模式如下圖右(圖略)。
（一）儀器的校準方法
現(xiàn)代血液分析儀的校準在操作手冊中都有嚴格的方法，在校準前，必須確認儀器分析性能，包括精度、線性、交叉污染等指標。采用新鮮血或穩(wěn)定血液校準時，應考慮不同的影響因素，分述如下。
1.新鮮血液作為校準品
以新鮮血液作為校準品，其值必須用參考方法或選擇性方法來確定。尤其是血液的新鮮程度，將明顯影響校準結(jié)果。其次，根據(jù)校準準確度要求，為了減少隨機誤差，達到校準，必須采用足夠數(shù)量的標本。表3顯示了標本數(shù)量和校準準確度之間關系。
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