自1983年Warren和Marshall報告，從胃炎患者胃粘膜分離幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp)以來，越來越多的資料表明，Hp與慢性胃炎，消化性潰瘍關(guān)系密切，歷此，為了有效的防治Hp相關(guān)慢性胃炎、消化性潰瘍等疾病，需要一種快速、準確而直觀的檢測Hp手段。目前，檢測Hp手段較多，包括：切片法、涂片法、刷檢法、培養(yǎng)法、尿素酶法、13C呼氣試驗法及抗體檢法等。這些方法歸納起來，有以下缺點：①需取材標—費事；②標本需要處理—費時間；③作者的新鮮胃切除標本實驗表明，Hp在胃內(nèi)的分布并非均勻，如局部取樣檢測，不可避免的出現(xiàn)假陰性。那么，能否將胃內(nèi)的Hp檢測直觀化呢？就此問題，我們進行基礎(chǔ)及臨床的探討。
1 基礎(chǔ)研究
1.1 原理
幽門螺桿菌是棲息在胃粘膜的革蘭陰性螺旋狀短桿菌，具有強的尿素酶科活性，將尿素分解成氨和二氧化碳，氨屬堿性，提高胃內(nèi)pH值，使含有酚紅的試劑由桔黃色變成粉紅色或紅色。
1.2 試劑的研制
確定一定濃度的Hp分解尿素，改變pH值，使試劑顏色改變的尿素和酚紅的濃度。方法是將一定濃度的幽門螺桿菌，即5×10CFU/ML分別加入不同濃度尿素和酚紅溶液中，觀察其顏色變化（表1)。
實驗結(jié)果表明，一定濃度的Hp分解尿素，改變pH值，使試劑顏色改變的尿素和酚紅的最適宜濃度分別為0.5mol/L及0.025％
表1 不同濃度素與酚紅溶液中Hp的顏色
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尿素濃度（mol/L) |
酚濃度（％) |
顏色變化 |
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0.1 |
0.005 |
－ |
|
0.2 |
0.010 |
－ |
|
0.3 |
0.015 |
－ |
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0.4 |
0.020 |
－ |
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0.45 |
0.025 |
＋ |
1.3 Hp分解尿素的適宜pH
我們配成上述試劑后噴灑于胃粘膜，發(fā)現(xiàn)除極個別病例胃粘膜著粉紅色或紅色，絕大多數(shù)病例并不著色，這是什么原因呢?后來發(fā)現(xiàn)Hp菌體所含的尿素酶，分解尿素的最適宜pH值為5～8，而慢性胃炎，尤其是消化性潰瘍病人的pH值多在1～3，我們認為使Hp分解尿素，必須改胃內(nèi)的pH值，根據(jù)胃酸泵抑制劑奧美拉唑和胃H2受體阻滯劑Famotidine20mg或檢查前1h靜脈注射Famotidine 20mg，檢測慢性胃炎，消化性潰瘍共30例，用pH檢測慢性胃炎，消化性潰瘍共30例，用pH檢測導管從胃鏡活檢孔插入檢測胃pH值，結(jié)果pH值為5.0～5.5，2例；5.6～6.0，15例；6.1～6.5，8例；6.6～7.0，5例。
以上結(jié)果表明，檢查前1a晚上服奧美拉唑20mg，或檢查前1h靜脈注射famotidine 20mg，胃pH值達到5.0～7.0。
2 臨床研究
2.1 對象與方法
本組175例均經(jīng)GIF—100型電子胃鏡診斷，其中慢性胃炎100例，胃潰瘍25例，十二指腸潰瘍50例。檢查前1d晚上口服奧美拉唑20mg。插入胃鏡后先將胃液抽空，胃竇、胃角及胃體各取1塊活檢做切片，吉姆薩染色、檢測Hp，以作與噴灑法相對照。然后經(jīng)塑料管注入我消化實驗室研制的試劑噴灑于胃竇、胃角、胃體及潰瘍周圍，觀察顏色變化，胃粘膜被染成粉紅色或紅色為陽性。
3 結(jié)果 見表2，表3。
表2 試劑噴灑與切片法相對照結(jié)果
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方 法 |
慢性胃炎（n：100) |
胃潰瘍（n：25) |
十二指腸潰瘍（n：50) |
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切片法Hp陽性率(％) |
50.0 |
72.0 |
80.0 |
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試劑噴灑Hp陽性率(％) |
68.0 |
80.0 |
90.0 |
表3 慢性胃炎、胃潰瘍、十二指潰瘍的染類型（％)
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試劑反應 |
n |
彌慢性著色 |
局灶性著色 |
散在性著色 |
不著色 |
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慢性胃炎 |
100 |
57(57.0) |
2(2.0) |
9(9.0) |
32(32.0) |
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胃潰瘍 |
25 |
13(52.0) |
5(20.0) |
2(8.0) |
5(20.0) |
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十二指潰瘍 |
50 |
34(68.0) |
4(8.0) |
7(14.0) |
5(100.0) |
4 討論
目前，檢測Hp的方法較多，包括切片法、涂片法、刷檢法、培養(yǎng)法、尿素酶法、13C呼氣試驗法及抗體檢測法等。這些檢查均需一定的時間，1988年作者研制的快速Hp檢測試劑，只需幾秒至1min以內(nèi)即可檢測Hp，但其缺點是取胃粘膜活檢的局限性可能出現(xiàn)假陰性。本方法是Hp菌體內(nèi)含有豐富的尿素酶—分解尿素—改變pH（偏堿性)—試劑由桔黃色變?yōu)榉奂t色或紅色的原理設(shè)計。伊藤報告Hp尿素酶活性的適宜pH值為5.0左右。我們從臨床試驗驗證，病人在受檢前一天晚上，服胃酸泵抑制劑奧美拉唑20mg或胃組織胺H2受體阻滯劑famotidine 20mg靜脈注射60min后，胃pH值達到5～7。
作者采用新鮮胃切除標本反復檢測Hp結(jié)果表明，Hp在胃粘膜的分布并非均一，提示胃粘活檢檢法檢測Hp可能出現(xiàn)假陰性，本方法可除假陰性。
本文慢性胃炎100例的著色率為68％，切片法Hp陽性率為60％，胃潰瘍25例的著色率為80％，切片法Hp陽性率為72％，十二指腸潰瘍50例的著色率為90％，切片法Hp陽性率為80％，提示切片法確有假陰性。
內(nèi)鏡下胃粘膜萎縮輕中度的17例中5例呈彌漫性著色，2例呈散在性著色，而胃粘膜萎縮明顯的4例均不著色。另外，本文還提示，胃內(nèi)Hp的分布以幽門腺領(lǐng)域為多，越向胃底腺區(qū)，Hp的分布也越稀疏。胃潰瘍25例中13例呈彌漫性著色，5例呈局灶性著色，2例呈散在性著色，且在這些著色的部位中均檢出Hp，令人感興趣的是7例胃潰瘍周圍粘膜呈深著色，其中包括難治性胃潰瘍3例。十二指腸潰瘍50例中34例（68.0％)呈彌漫性著色，4例（8.0％)呈局灶性著色，7例（14.0％)呈散在性著色，在這些著色組織中均檢出Hp。
本文資料還表明，Hp陽性的胃及十二指腸潰瘍較陰性者治愈時間延長，且復發(fā)率也高。上述結(jié)果表明，在治療慢性胃炎和消化性潰瘍的過程中必須清除Hp，本文則提供了在內(nèi)鏡下直接清除Hp的廣闊前景。內(nèi)鏡下噴灑藥物直接清除Hp的臨床實驗正在進行。
李增燦 陳頻佳 侯鵬 陳田 李揚
解放軍211醫(yī)院消化內(nèi)科（哈爾濱 150080)
