一、癌胚抗原的特點(diǎn)
癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA)是分子量約20萬的糖蛋白，具有二級(jí)以上結(jié)構(gòu)。不同腫瘤中提取的CEA雖然抗原性相似，但所含唾液酸及其它糖組分的含量不一定相同，故有多個(gè)抗原決定簇，能與非特異性反應(yīng)抗原NCA、NCA-2和正常胎兒糞抗原等發(fā)生交叉反應(yīng)。NCA存在于正常肺、胰腺、粒細(xì)胞、單核細(xì)胞及巨噬細(xì)胞內(nèi)，也存在于正常腸粘膜、胃粘膜腸化生腺體細(xì)胞及膽汁內(nèi)。臨床血清學(xué)檢查CEA對(duì)結(jié)腸癌、肺癌、胰腺癌、胃癌及其它腺上皮性惡性腫瘤等的診斷有較大價(jià)值。免疫細(xì)胞化學(xué)研究可以明確CEA的定位和分布，也可以通過組織切片和分泌物涂片進(jìn)行臨床診斷和鑒別診斷。
二、癌胚抗原的免疫細(xì)胞化學(xué)染色
1．組織加工有人提出用冰凍切片進(jìn)行CEA免疫細(xì)胞化學(xué)染色。由于非特異性熒光和需要一定設(shè)備條件，有人改用福爾馬林固定和胰酶消化的方法。從我們的體會(huì)看，福爾馬林固定后的切片CEA的部分抗原決定簇被遮蓋，陽性結(jié)果顯著受到影響。但是用冷酒精固定后的組織切片，CEA的陽性率明顯升高，而且結(jié)果仍很清晰。goldenbery等同時(shí)進(jìn)行CEA酶標(biāo)記組織，而福爾馬林固定的組織切片中CEA檢出范圍為3.0～7.0ng/g組織，酒精固定的組織切片比福爾馬林固定者敏感2～3倍。有趣的是我們用酒精固定26個(gè)月的切片進(jìn)行染色，效果仍然很好。說明冷酒精固定法便于進(jìn)行回顧性研究。雖然酒精固定后組織收縮比較明顯，但不影響組織結(jié)構(gòu)及形態(tài)，而且可以進(jìn)行多種抗原的定位研究，操作簡(jiǎn)單，是值得推薦的一種組織固定方法。冷酒精固定方法和步驟同抗體產(chǎn)生細(xì)胞的研究。
2．染色方法的選擇根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件和抗體特點(diǎn)選擇染色方法。PAP和ABC技術(shù)可以采用，但試劑價(jià)格較昂貴，步驟較復(fù)雜。我們認(rèn)為間接熒光或間接酶技術(shù)即可獲得滿意結(jié)果。間接酶染色技術(shù)步驟如下：
�。�1)冷酒精固定的組織石蠟包埋，組織切片，常規(guī)脫蠟后在PBS中放置5min，過一次蒸餾水清除玻片上的沉淀物后風(fēng)干，加含3%H2O2甲醇一滴在切片上，放置20min后再PBS沖洗3次，過蒸餾水后風(fēng)干。
�。�2)加稀釋好的兔抗CEA血清（稀釋度根據(jù)染色工作效價(jià))在37℃濕盒內(nèi)放置45min。
�。�3)PBS清洗3次后風(fēng)干，再加HRP標(biāo)記物的羊抗兔IgG（稀釋度也要根據(jù)染色工作效價(jià))，37℃濕盒內(nèi)放置45min。
�。�4)PBS清洗3次后加新鮮配制的含3%H2O2pH7.6Tris緩沖液（10ml溶液中含二氨基聯(lián)苯胺5mg)中暗處反應(yīng)5～8min（邊反應(yīng)邊在顯微鏡下觀察)，自來水沖洗，用1%甲基綠復(fù)染2～5min，再次自來水沖洗，常規(guī)脫水、透明和封片，在光鏡下觀察。醫(yī)學(xué).全在線www.med126.com
3．陽性結(jié)果判斷及計(jì)數(shù)檢查前應(yīng)當(dāng)對(duì)CEA的分布有一定理性認(rèn)識(shí)，而且用正常結(jié)腸組織和陽性組織作對(duì)照觀察。CEA以三種形式出現(xiàn)在胃腸道組織切片中：①腔面分布。沿腺腔面的胞漿有棕紅色酶著色。這是胃粘膜中腸上皮化生腺體、高分化腺癌和正常結(jié)腸腺體的CEA分布形式。②胞漿分布。在低分化粘液細(xì)胞癌中，CEA多位于胞漿。③粘液分布。在高分化腺癌的腺腔和粘液細(xì)胞癌周圍的粘液中有CEA著色。
4．腹水免疫細(xì)胞化學(xué)染色臨床上鑒別良惡性腹水可采用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。抽取200～300ml腹水，離心后取細(xì)胞沉淀進(jìn)行直接涂片、干燥、酒精固定后采用間接熒光染色。具體的方法是：在腹水涂片上加兔抗CEA抗血清（1：25稀釋，稀釋液為BPS緩沖液)，在37℃濕盒內(nèi)放置45min后BPS沖洗，共10min，再加入FITC標(biāo)記的羊抗兔IgG（1：20稀釋，稀釋液為0.1%伊文氏藍(lán)緩沖液)，在37℃濕盒內(nèi)放置45min后，PBS沖洗3次，共10min，用50%甘油封片，熒光顯微鏡觀察。有綠色熒光陽性細(xì)胞的片子再進(jìn)行HE染色，做對(duì)照觀察和判斷。也可以將細(xì)胞沉淀物在試管內(nèi)直接進(jìn)行間接熒光染色（方法同T淋巴細(xì)胞染色)。我們發(fā)現(xiàn)，不論采用哪種方法，都可能出現(xiàn)非特異性著色。少數(shù)淋巴細(xì)胞也能出現(xiàn)熒光或酶著色。其機(jī)理尚不清楚，如果采用伊文氏藍(lán)作對(duì)比熒光染色，可明顯減少非特異性熒光，而且淋巴細(xì)胞較小，腺癌細(xì)胞較大，有利于進(jìn)行鑒別診斷。
三、臨床意義
免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)可以確定CEA的組織發(fā)生部位，根據(jù)陽性特點(diǎn)可以判斷癌細(xì)胞的位置。我們的研究發(fā)現(xiàn)正常結(jié)腸組織CEA為弱陽性，多非常清晰分布在腔面。但結(jié)腸癌組織中CEA著色帶較寬，多為強(qiáng)陽性，而且不規(guī)整。對(duì)胃粘膜的研究發(fā)現(xiàn)正常胃腺體均為陰性，腸化生腺體細(xì)胞弱陽性。胃腺瘤細(xì)胞也含有CEA。70%以上胃癌細(xì)胞CEA強(qiáng)陽性，特別是粘液細(xì)胞癌，光鏡下癌細(xì)胞分散浸潤(rùn)，無法確定其轉(zhuǎn)移及浸潤(rùn)范圍。用免疫熒光或免疫酶技術(shù)進(jìn)行染色，根據(jù)陽性細(xì)胞分布可作出正確判斷。在肝臟或其它部位轉(zhuǎn)移癌有時(shí)因細(xì)胞分化不良，無法確定其組織來源。如果用免疫細(xì)胞化學(xué)染色，發(fā)現(xiàn)CEA陽性細(xì)胞說明來源于腺上皮的癌腫，可能來自胃腸道或卵巢等組織。用胸腹水進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色對(duì)臨床診斷有實(shí)用價(jià)值。Walts對(duì)26例腫瘤病人滲出液和抽吸液離心后做免疫酶染色，發(fā)現(xiàn)13例有CEA陽性細(xì)胞。11例常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查陰性的腫瘤病人發(fā)現(xiàn)8例胸腹水中有CEA陽性細(xì)胞。如果膽高CEA抗體的特異性，改進(jìn)組織加工方法，排除非特異性著色，可望提高診斷價(jià)值。已經(jīng)有人在血清學(xué)監(jiān)測(cè)CEA診斷胃腸道腫瘤的基礎(chǔ)上，將CEA標(biāo)記125I進(jìn)行放射掃描定位診斷和用CEA標(biāo)記131I或抗癌藥物進(jìn)行腫瘤治療的報(bào)道。
