免疫熒光細胞化學是根據(jù)抗原抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光素制成熒光標記物，再用這種熒光抗體（或抗原)作為分子探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應抗原（或抗體)。在細胞或組織中形成的抗原抗體復合物上含有熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標本，熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光（黃綠色或桔紅色)，可以看見熒光所在的細胞或組織，從而確定抗原或抗體的性質(zhì)、定位，以及利用定量技術測定含量（圖3-1)。
圖3-1 紫外光激發(fā)熒光物質(zhì)放射熒光示意圖
用熒光抗體示蹤或檢查相應抗原的方法稱熒光抗體法；用已知的熒光抗原標記物示蹤或檢查相應抗體的方法稱熒光抗原法。這兩種方法總稱免疫熒光技術，以熒光抗體方法較常用。用免疫熒光技術顯示和檢查細胞或組織內(nèi)抗原或半抗原物質(zhì)等方法稱為免疫熒光細胞（或組織)化學技術。醫(yī).學 全在.線提供www.med126.com
免疫熒光細胞化學分直接法、夾心法、間接法和補體法。
一、直接法
1．檢查抗原法 這是最早的方法，用已知特異性抗體與熒光素結合，制成熒光特異性抗體，直接與細胞或組織中相應抗原結合，在熒光顯微鏡下即可見抗原存在部位呈現(xiàn)特異性熒光。此法很特異和簡便，但一種熒光抗體只能檢查一種抗原，敏感性較差（圖3-2)。
圖3-2 直接法
2．檢查抗體法 將抗原標記上熒光素，即為熒光抗原，用此熒光抗原與細胞或組織內(nèi)相應抗體反應，而將抗體定位檢測出來。
二、間接法
1．檢查抗體法（夾心法) 此法是先用特異性抗原與細胞或組織內(nèi)抗體反應，再用此抗原的特異性熒光抗體與結合在細胞內(nèi)抗體上的抗原相結合，抗原夾在細胞抗體與熒光抗體之間，故稱夾心法。
2．檢查抗體法 用已知抗原細胞或組織標本的切片，加上待檢血清，如果其中含有切片中某種抗原的抗體，抗體便沉淀結合在抗原上，再用間接熒光抗體（抗種屬特異性IgG熒光抗體)與結合在抗原上的抗體反應（如檢測人血清中的抗體必需用抗人IgG熒光抗體等)，在熒光顯微鏡下可見抗原抗體反應部位呈現(xiàn)明亮的特異性熒光。此法是檢驗血清中自身抗體和多種病原體抗體的重要手段（圖3-3)
圖3-3 間接法
3．檢查抗原法雙薄片 此法是直接法的重要改進，先用特異性（對細胞或組織內(nèi)抗原)抗體（或稱第一抗體)與細胞標本反應，隨后用緩沖鹽水洗去未與抗原結合的抗體，再用間接熒光抗體（也稱第二抗體，種特異性)與結合在抗原上的抗體（是第二抗體的抗原)結合，形成抗原-抗體-熒光抗體的復合物。由于結合在抗原抗體復合物上的熒光抗全顯著多于直接法，從而提高了敏感性。如細胞抗原上每個分子結合3～5個分子抗體，當此抗體作為抗原時又可結合3～5分子的熒光抗體，所以和直接法相比熒光亮度可增強3至4倍。此法除靈敏性高外，它只需要制備一種種屬間接熒光抗體，可以適用于多種第一抗體的標記顯示。這是現(xiàn)在最廣泛應用的技術。
