臨床免疫學(xué)及檢驗(yàn)授課教案-實(shí)驗(yàn)課教案:免疫印跡檢測ENA抗體

教研室

臨床免疫檢驗(yàn)

課程

名稱

免疫學(xué)及檢驗(yàn)

學(xué)時

4

檢驗(yàn)專業(yè)2003 級   1、2、3班

帶教時間

2006 年11 月 16 日---2006   年  11月17 日

教師

姓名

王慧

職稱

主管技師

實(shí)檢（見習(xí))項(xiàng)目

免疫印跡檢測ENA抗體

本次實(shí)驗(yàn)

（見習(xí))

目的、

要求

1．掌握免疫印跡法原理、ENA多肽抗體測定的臨床意義

2、熟悉ENA多肽抗體測定的操作及結(jié)果判斷

內(nèi)容與安排

學(xué)時

一、介紹本次實(shí)驗(yàn)、見習(xí)的重點(diǎn)及安排

（實(shí)驗(yàn)課應(yīng)包括：1、實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的采集，2、實(shí)驗(yàn)操作步驟，

3、實(shí)驗(yàn)操作過程注意事項(xiàng)，4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的評價(jià)及臨床意義)

1、提問：什么是免疫印跡試驗(yàn)？什么是ENA？什么是ENA抗體？

2、復(fù)習(xí)相關(guān)內(nèi)容：免疫印跡試驗(yàn)的原理-典型的印跡實(shí)驗(yàn)包括三個步驟：
 第一階段為SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE)。
第二階段為電轉(zhuǎn)移。
第三階段為酶免疫定位。

3、免疫印跡法檢測ENA的原理：將待檢血清加在硝酸纖維膜上，待檢血清中存在的抗ENA抗體分別與硝酸纖維膜上的相應(yīng)抗原區(qū)帶結(jié)合，當(dāng)再加入酶標(biāo)記抗人IsC抗體后形成抗原—抗體-酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，再加入酶的底物，出現(xiàn)顯色反應(yīng)，凡有抗ENA抗體與膜上抗原結(jié)合的位置，均會因酶促反應(yīng)而顯色。參照此時抗原區(qū)帶的分子量及各區(qū)帶的相對位置，可辨讀出各特異性抗ENA抗體。

4、器材與試劑

5、操作：配制洗滌液→加樣→混勻→置37度溫箱水浴→洗滌→加酶結(jié)合物→置37度溫箱水浴→洗滌→顯色置37度溫箱水浴→洗滌→終止顯色

6、注意事項(xiàng)

7、結(jié)果判斷

8、ENA抗體區(qū)帶顯色及意義

（1)抗U₁RNP抗體：多見于混合性結(jié)締組織病。

（2)抗Sm抗體：抗Sm抗體是SLE的特異性標(biāo)志之一。

（3)抗SS-A、抗S會計(jì)資格S-B抗體：主要見于SS。

（4)抗Jo-1抗體：PM和DM的標(biāo)志性抗體。

（5)抗Rib抗體：SLE的標(biāo)志性抗體

（6)抗Scl-70抗體：  PSS的標(biāo)志性抗體

9、方法學(xué)評價(jià)

11、學(xué)生分組試驗(yàn)

二、討論思考題：

1、為何IBT具有高度的特異性和敏感性？

2、如何正確判斷ENA多肽抗體類型，為什么？

三、小結(jié)要點(diǎn)

1、實(shí)驗(yàn)操作情況

2、結(jié)果判斷時需注意帶型與顯帶位置相結(jié)合進(jìn)行

四、布置學(xué)生作業(yè)內(nèi)容

1、書寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告(包括：實(shí)驗(yàn)?zāi)康�、原理、器材和試劑、操作步驟、注意事項(xiàng)、、方法學(xué)評價(jià)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果、結(jié)果分析及結(jié)論、討論)

2、思考題

五、下次實(shí)驗(yàn)（見習(xí))課預(yù)習(xí)范圍及后續(xù)程介紹

下次實(shí)驗(yàn)課內(nèi)容為：免疫熒光試驗(yàn)等(電教)

預(yù)習(xí)內(nèi)容：什么ANA？

4學(xué)時

教案制定時間：  2006   年   月 日   帶教老師簽名：王慧

專業(yè)主任審閱意見；

   簽名：  年   月   日