日本血吸蟲HGPRT重組抗原與不同佐劑聯(lián)合應用對小鼠免疫保護作用的研究

如何提高免疫保護效果一直是疫苗研究的熱點。佐劑對免疫效果有一定的影響,依據(jù)免疫途徑、免疫反應類型、免疫持續(xù)時間及抗原質(zhì)量等因素的不同,選擇合適的佐劑[8],可增強疫苗的免疫原性,減少提供保護性免疫所需的抗原或接種次數(shù),優(yōu)化免疫應答,是有效提高重組抗原免疫保護力的手段之一。目前已使用的佐劑或增強劑有鋁鹽、礦物油、鈣鹽、胞壁酰肽、生物降解多聚體、微生物片段、多糖、細胞因子和納米佐劑等[9]。弗氏佐劑是常見的一種,但鑒于弗氏不完全佐劑(FCA)毒副作用大及在機體內(nèi)長期殘留等難以解決的缺點,因此研究高效低毒的人用性佐劑不失為血吸蟲免疫預防的有效途徑[10]。Montanide ISA 206佐劑(人用)是一種水/油/水(W/O/W)型的新型佐劑,當油性佐劑與水相混合后便形成水包油乳劑,具有易乳化、黏性低、易注射等特點,W/O/W型的結構使得包含于外部水相中的抗原表位更突出,因而更容易被機體的免疫系統(tǒng)所識別;內(nèi)部水相中的抗原能顆�；�而緩慢釋放,所以它能夠持續(xù)激發(fā)機體的免疫應答[11,12]。Montanide ISA 206與抗原乳化的研究表明,這種乳化劑完全可能保持持續(xù)的安全性,乳化物顆粒大小具有良好的可控性,抗原的使用劑量可限制至低量,且在乳化劑中穩(wěn)定存在,可在人體使用。蘇良科等[13]在研制預防豬鏈球菌病的亞單位疫苗中,經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)Montanide ISA 206佐劑的免疫增強作用要高于鋁佐劑和CpG佐劑。因此,選擇合適的佐劑有助于提高疫苗的免疫原性。

本研究在前期成功克隆表達日本血吸蟲HGPRT重組蛋白的基礎上,通過改變免疫方式,分別使用Montanide ISA 206佐劑、弗氏佐劑與重組蛋白一起免疫C57BL/6小鼠,大大提高了重組蛋白的免疫原性,誘導出小鼠體內(nèi)較高水平的特異性IgG。并且重組蛋白加佐劑組誘導的免疫保護力均大大提高,減蟲率、減雌雄合抱率和肝組織減卵率分別達到了53.7%、59.3%、44.9%和43.3%、44.1%、33.0%;減蟲率均超過了40%。其中Montanide ISA 206佐劑與重組蛋白聯(lián)合組免疫保護力更加明顯,減卵率也超過了40%。因此,日本血吸蟲在宿主肝的成熟蟲卵數(shù)量減少,可能主要是血吸蟲細胞中HGPRT分子受到干擾,使得核苷肌苷酸(IMP)或鳥苷酸(GMP)的合成受阻,從而導致雌蟲子宮蟲卵數(shù)、排卵數(shù)減少。而此保護力與其誘導的小鼠體內(nèi)特異性IgG水平的升高有關。

本研究證實日本血吸蟲HGPRT在抗生長發(fā)育及抗生殖效應方面是一個很有希望的疫苗候選分子,如果選用合適佐劑和免疫途徑,可獲得理想的免疫效果。進一步優(yōu)化重組HGPRT抗原的免疫方案,包括理想的佐劑、佐劑使用量以及免疫途徑等,正在進一步研究和驗證中。

作為疫苗,安全性是不可忽略的一個環(huán)節(jié)。動物和人體內(nèi)也存在HGPRT分子,并與血吸蟲HGPRT分子有一定的同源性,如人體內(nèi)HGPRT分子(GENE ID: 3251 HPRT1)與血吸蟲HGPRT分子同源性達67%,是否會引起宿主的自身免疫反應?蔡勝藍等[14]以血吸蟲HGPRT的DNA疫苗進行家兔的局部肌肉刺激實驗和豚鼠的全身過敏實驗,結果肌肉刺激實驗反應輕微,未出現(xiàn)變態(tài)反應。HGPRT分子作為候選疫苗的安全性值得進一步研究。

【參考文獻】

[1] 沈玉娟,夏超明,曹建平,等. 日本血吸蟲HGPRT編碼基因的克隆與表達[J]. 中國血吸蟲病防治雜志, 2007,19(3):165-169.

[2] 曹建平,李小紅,劉述先. 我國血吸蟲疫苗研究進展和展望[J]. 中華傳染病雜志, 2005,23(6): 418-420.

[3] Yuan L, Craig SP, McKerrow JH, et al. The hypoxanthine�瞘uanine phosphoribosyltransferase of Schistosoma mansoni. Further characterization and gene expression in Escherichia coli[J]. J Biol Chem, 1990, 265(23): 13528-13532.

[4] Yuan L, Wu CS, Craig SP, et al. Comparing the human and schistosomal hypoxanthine�瞘uanine phosphoribosyltransferases by circular dichroism [J]. Biochim Biophys Acta, 1993, 1162(1/2): 10-16.

[5] Craig SP 3rd, Mckerrow JH, Newport GR, et al. Analysis of cDNA encoding the hypoxanthine�瞘uanine phosphoribosyltransferase (HGPRTase) of Schistosoma mansoni; a putative target for chemotherapy[J]. Nucleic Acids Res, 1988, 16(14B):7087-7101醫(yī)學 全在.線提供m.zxtf.net.cn.

[6] 李文凱,汪世平,呂志躍,等. 日本血吸蟲SIEA26��28kDa的抗雌蟲生殖免疫作用——HGPRT是否是主要的靶抗原(英文) [J].中國人獸共患病雜志, 2005,21(1):1-4.

[7] 余俊龍,汪世平,何 卓,等. 日本血吸蟲中國株次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶的克隆、表達及其免疫保護性研究[J].生物化學與生物物理進展,2006,33(7):665-672.

[8] Aucouturier J, Dupuis L, Ganne V. Adjuvants designed for veterinary and human vaccines [J]. Vaccine,2001, 19(17-19):2666-2672.

[9] 羅永慧,易新元. 提高血吸蟲疫苗保護性效果的研究進展[J]. 國外醫(yī)學:寄生蟲病分冊,2004, 31(3):112-116.

[10] Keefer MC, Wolff M, Gorse GJ, et al. Safety and immunogenicity of Env2��3, a human immunodeficiency virus type I candidate vaccine, in combination with PPE/MF59[J].AIDS Res Hum Retroviruses,1997,13(14):1163.

[11] Ganne V, Eloit M, Laval A, et al. Enhancement of the efficacy of a replication�瞕efective adenovirus�瞯ectored vaccine by the addition of oil adjutants [J]. Vaccine,1994,12(13):1190-1196.

[12] Laval A, Ganne V, Aucouturier J, et al. Assessment of a new adjuvant range in a model for atrophic rhinitis[C]. Proceedings of the 15th IPVS Congress,Birmingham(England)，1998：5-9.

[13] 蘇良科,陸承平. 類M蛋白亞單位疫苗的佐劑篩選[J].中國獸藥雜志,2004,38(1):15-18.

[14] 蔡勝藍, 向選東, 汪世平,等.抗血吸蟲DNA疫苗pcDNA3/SjHGPRT局部肌肉刺激與全身過敏實驗[J]. 中國人獸共患病學報, 2009, 25(6): 528-530.

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