黃連上清丸－小檗堿的測定－薄層掃描法

本方法采用薄層掃描法測定黃連上清丸中小檗堿的含量。

本方法適用于中成藥黃連上清丸。

將供試品加鹽酸-甲醇水浴加熱，超聲提取，離心，上清液制成供試液。點(diǎn)樣、展開，薄層掃描儀用熒光掃描法進(jìn)行掃描，于波長λ=366nm測量小檗堿的吸收度積分值，計(jì)算其含量。

1. 苯

2.甲醇

3.醋酸乙酯

4.鹽酸

5.異丙醇

1 儀器

1.1 超聲清洗器

1.2 薄層掃描儀

1.3涂布器

應(yīng)能使吸附劑在玻璃板上手工或自動涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

1.4點(diǎn)樣器

一般采用微升毛細(xì)管或與之相應(yīng)的點(diǎn)樣器材。

1.5展開室

可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部雙槽，蓋子須密閉。

2材料

2.1玻板

用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。

2.2吸附劑

硅膠G，其顆粒大小一般要求直徑為10～40µm。

1. 對照品溶液的制備

精密稱取干燥至恒重的鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

取本品1丸，切碎，精密稱取1g，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸-甲醇(1:10)10mL，稱定重量，置50℃熱水浴中加熱15分鐘，放冷，超聲提取30分鐘，放冷，稱重，補(bǔ)足減失重量，離心，取上清液作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

1.薄層板制備

將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.25～0.5mm)取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應(yīng)均勻，平整，無麻點(diǎn)、無氣泡、無破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，或用商品預(yù)制板。

2.點(diǎn)樣

精密吸取供試品溶液1µL、對照品溶液1µL，分別交叉點(diǎn)于硅膠G薄層板上，如用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣到薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況，以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。

3.展開

將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，以苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-水（6:3:1.5:1.5:0.3)10℃以下放置12小時(shí)的下層溶液為展開劑，雙槽展開,氨蒸氣飽和15分鐘，展開至8～15cm時(shí)，取出薄層板，晾干。

4.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密吸取對照品溶液1、2、3、4、5µL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，依法展開、掃描，測定斑點(diǎn)熒光強(qiáng)度積分值，以對照品溶液進(jìn)樣量對斑點(diǎn)面積積分值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，獲得回歸方程。

5.含量測定

在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，選擇反射方式，采用熒光掃描法，波長：λ=366nm，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計(jì)算。

用外標(biāo)法測定時(shí)，若對照品各數(shù)據(jù)點(diǎn)在校正曲線上呈一通過原點(diǎn)的直線時(shí)，可用一點(diǎn)法校正，如不通過原點(diǎn)通常宜采用二點(diǎn)法校正，必要時(shí)用多點(diǎn)法校正。

楊霞,李振國,張同領(lǐng).黃連上清丸中小檗堿的含量測定.中國藥事,2000，14(1):38-42.