苦丁茶老葉—槲皮素和山柰素的含量測定方法—HPLC

儀器   Waters液相色譜儀（美國Waters公司)

色譜條件 　色譜柱：Waters公司N0va—PakC18柱（3.9 mm×300 mm，4 μm)；流動相：甲醇—0.4 %磷酸溶液（50∶50) ；流速：0.7 mL/min；檢測波長：360 nm；柱溫：40 ℃

對照品溶液制備  精密稱取槲皮素對照品8.12 mg，山柰素對照品8.34 mg，分別置50 mL量瓶中，用甲醇溶解，并稀釋至刻度再稀釋2.5倍即得對照品溶液。

供試品溶液制備  稱取苦丁茶老葉20 g，剪碎，加70 %乙醇200 mL，水浴回流1.5 h，過濾，殘渣再加70 %乙醇100 mL，回流1 h；合并濾液，用70 %乙醇定容至250 mL量瓶中。取20 mL提取液置水浴上揮干，再用20 mL甲醇溶解殘渣并轉(zhuǎn)移到100 mL錐形瓶中，加入25 %鹽酸溶液5 mL，置水浴上回流水解0.5 h后，取出，迅速冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。