方法名稱： |
苦丁茶—蘆丁的含量測(cè)定—RP—HPLC |
應(yīng)用范圍： |
本方法適用于苦丁茶中黃酮類化合物（蘆丁)含量的測(cè)定 |
方法原理： |
本品細(xì)粉加甲醇超聲提取，經(jīng)液相色譜分離，在390 nm處測(cè)定峰面積，外標(biāo)法計(jì)算含量 |
儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)條件： |
儀器 WATERS 600E 高效液相色譜儀，WATERS 2487 UV 檢測(cè)器，HS色譜數(shù)據(jù)工作站 色譜條件 色譜柱：Symmetry C18 （5μm，250 mm×4. 6 mm) ；流動(dòng)相：甲醇—水—磷酸（55∶44. 5∶0. 5)；流速：1. 0 mL/ min；檢測(cè)波長(zhǎng)：390 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：20 μL |
試樣制備： |
對(duì)照品溶液制備 準(zhǔn)確稱取干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品25. 00 mg于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，得濃度為2. 500 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)貯備液，裝入棕色瓶中保存?zhèn)溆�，吸�? mL標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用甲醇稀釋定容至50 mL，得濃度為0. 250 mg/ mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。 供試品溶液制備 將苦丁茶粉碎，用100目篩子過(guò)篩，準(zhǔn)確稱取1. 00 g苦丁茶末，加50 mL甲醇，超聲振蕩50 min，提取溫度為40 ℃，3500 r/ min離心20 min，取上清液。濾渣再加30 mL甲醇，超聲振蕩40 min，3500 r/min離心20 min，取上清液，合并上清液至100 mL容量瓶，用甲醇定容至100 mL。放冷，取一定量的提取液過(guò)0.45 μm 濾膜，即得。 |
操作步驟： |
分別精密吸取蘆丁對(duì)照液以及苦丁茶供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積。以外標(biāo)法計(jì)算蘆丁含量。 |
附件： |
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備注： |
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參考文獻(xiàn)： |
潘慧娟，唐婷. 反相高效液相色譜法測(cè)定苦丁茶中黃酮類化合物（蘆丁) 的含量. 杭州醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校學(xué)報(bào). 2003，24（3)：126～128 |
