| 公開(公告)號 | CN1485342A |
| 公開(公告)日 | 2004.03.31 |
| 申請(專利)號 | CN03134442.9 |
| 申請日期 | 2003.07.30 |
| 專利名稱 | 呼吸道合胞病毒和腺病毒特異性免疫球蛋白制備方法 |
| 主分類號 | C07K16/10 |
| 分類號 | C07K16/10;C07K16/18;G01N33/569;G01N33/68 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 廣東佰易藥業(yè)有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 張國成;許東亮;余軍 |
| 地址 | 512026廣東省韶關(guān)市芙蓉東路112號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 李鄭建 |
| 國省代碼 | 廣東;44 |
| 主權(quán)項 | 抗呼吸道合胞病毒和腺病毒高效價特異性免疫球蛋白制備方法，其特征在于，包括以下步驟：1)制備呼吸道合胞病毒腺病毒抗原將呼吸道合胞病毒和腺病毒分別接種于已成長單層的Hep-2細(xì)胞或hala細(xì)胞或人胚腎細(xì)胞，37℃孵育，每天觀察細(xì)胞病變情況，當(dāng)致細(xì)胞病變(CPE)出現(xiàn)+++以上時或經(jīng)病毒抗原檢測陽性，收集細(xì)胞及上清，病毒滅活后經(jīng)超聲打碎、冰凍保存；或按呼吸道合胞病毒和腺病毒的基因序列用基因工程方法表達(dá)制備保護性抗原；2)純化病毒抗原以蔗糖淀層濃縮或以不連續(xù)梯度密度離心純化病毒抗原，或?qū)游鑫街椒兓《究乖�；將超聲打碎的呼吸道合胞病毒和腺病毒抗�?000×9離心20分鐘，棄去沉渣留上清，裝入以15％、30％、45％、60％的蔗糖制備的不連續(xù)梯度密度離心管，超速離心，165000×9g，離心2小時，根據(jù)病毒的分子量確定該病毒所在離心管位置，吸出冰凍保存；3)建立篩選高效價特異性抗呼吸道合胞病毒和腺病毒免疫球蛋白方法用提取的呼吸道合胞病毒及腺病毒抗原10μg/ml～20μg/ml包被酶板，建立ELISA方法或用病毒感染的細(xì)胞建立免疫熒光方法或用病毒抗原建立生物芯片方法，用以篩選正常人群獻(xiàn)血源中高效價特異性抗呼吸道合胞病毒和腺病毒免疫球蛋白；并用中和試驗等方法確定高效價特異性免疫球蛋白的有效起始濃度；4)用上述方法篩選的原料用低溫乙醇方法或離子交換層析法方法或親和層析法提取高效價特異性抗呼吸道合胞病毒和腺病毒免疫球蛋白；5)提純后的抗呼吸道合胞病毒和腺病毒免疫球蛋白經(jīng)60±1℃，10小時滅活病毒和/或在pH值4.1±0.3，在24±1℃條件下放置21天滅活病毒，再經(jīng)除菌過濾，分裝成抗病毒免疫球蛋白。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種有既可預(yù)防，又可治療、標(biāo)本兼治的抗呼吸道合胞病毒和腺病毒高效價特異性免疫球蛋白的制備方法，首先用呼吸道合胞病毒或腺病毒經(jīng)Hep-2細(xì)胞，Hala細(xì)胞或人胚腎細(xì)胞培養(yǎng)增殖，制備病毒抗原，或根據(jù)呼吸道合胞病毒和腺病毒基因序列用基因工程方法表達(dá)制備的保護性抗原。其次經(jīng)組織培養(yǎng)制備的病毒抗原，以不連續(xù)梯度密度離心純化抗原，或以20％蔗糖淀層濃縮抗原，或?qū)游鑫街椒兓乖�。然后用所制備的純化抗原，建立篩選高效價抗呼吸道合胞病毒和腺病毒免疫球蛋白的方法，及體外中和病毒試驗等。最后用低溫乙醇方法或離子交換層析法方法或親和層析法在具有高效價呼吸道合胞病毒和腺病毒免疫球蛋白血源中提取免疫球蛋白。 |
| 國際公布 |
