鵝禽流行性
感冒的確診方法有哪些?
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實(shí)驗(yàn)室診斷本病確診必須進(jìn)行病毒分離鑒定和血清學(xué)試驗(yàn)。(1)病毒分離①病料采集與處理。分離病毒的病料應(yīng)采自流行早期具有典型病變的患鵝。病鵝或死鵝應(yīng)用無(wú)菌手續(xù)，采取腦、肝、脾組織器官。將病料磨細(xì)，加入滅菌生理鹽水或滅菌PBS液，制成1：5～1：10的懸液，經(jīng)3 000轉(zhuǎn)／分'離心30分鐘吸取上清液，按每毫升加入
青霉素、
鏈霉素各1 000單位，混勻后置4～8℃冰箱中作用2～4小時(shí)，或37℃溫箱中作用30分鐘。取少許液體，分別接種T鮮血瓊脂培養(yǎng)基和厭氧肉湯培養(yǎng)基，于37℃培養(yǎng)觀察48小時(shí)，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，作為病毒分離材料。也可吸取皮下滲出物，用滅菌生理鹽水或滅菌PBS液制成1：5懸液，經(jīng)3 000轉(zhuǎn)／分，離心30分鐘后吸取上清液，經(jīng)過(guò)濾器過(guò)濾，濾液按每毫升加入青霉素、鏈霉素各500單位，于37℃溫箱作用30分鐘后作為病毒分離材料。患病產(chǎn)蛋母鵝，用無(wú)菌手續(xù)取有病變卵泡數(shù)個(gè)，放置滅菌二重皿，置于冰箱內(nèi)凍結(jié)。采樣時(shí)將凍結(jié)卵泡取出立即用滅菌剪刀剪開(kāi)卵泡膜，將膜取出剪碎磨細(xì)，加入滅菌生理鹽水或滅菌PBS液制成1：5懸液，經(jīng)3 000轉(zhuǎn)／分，離心30分鐘，吸取上清液，按每毫升加入青霉素、鏈霉素各1 000單位，混勻，置37℃溫箱中作用30分鐘后作為病毒分離材料。②雞胚接種。用4～6枚11日齡SPF雞胚，或4～6枚11日齡未經(jīng)禽流感免疫雞群的雞胚，每胚絨尿腔接種上述病毒分離材料0.2毫升。接種18小時(shí)后每天照蛋4次，連續(xù)4天。通常于接種后24～48小時(shí)死亡，18小時(shí)內(nèi)死亡雞胚廢棄，18小時(shí)后死亡雞胚放置于4℃冰箱，氣室向上，冷卻4～12小時(shí)。用無(wú)菌手續(xù)收獲絨尿液，并做無(wú)菌檢查。渾濁的絨尿液和有菌生長(zhǎng)的絨尿液棄去不用。將清朗、無(wú)菌生長(zhǎng)和雞胚病變典型的絨尿液放置低溫冰箱凍結(jié)保存供進(jìn)一步鑒定。雞胚胚體皮膚充血、出血，
腦出血，絨尿膜增厚、充血。(2)病毒鑒定①血凝試驗(yàn)。在微量凝集板上，從第1孔起，在若干孔內(nèi)，用定量針頭每孔加入0. 025毫升生理鹽水。用定量針頭吸取0.025毫升等量被檢的雞胚絨尿液加入第1孔，依次做倍量稀釋，至最后一個(gè)量孔棄去余液。再用定量針頭每孔加入0. 025毫升1%雞紅細(xì)胞懸液，并用生理鹽水代替被檢雞胚絨尿液的紅細(xì)胞對(duì)照孔，立即在微量振蕩器上混勻，置室溫中30分鐘左右判定結(jié)果。凡能使雞紅細(xì)胞完全凝集的被檢病毒液最高稀釋倍數(shù)，稱為1個(gè)血凝單位。②血凝抑制試驗(yàn)。在微量凝集板上，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)HA亞型抗血清的種類和效價(jià)數(shù)排，均從第1孔起，用定量針頭在每孔加入0. 025毫升生理鹽水。在第1孔中分別加入已知抗血清o．025毫升，并依次做倍量稀釋至最后1孔棄去余液。每孔加入含有4個(gè)凝集單位0. 025毫升被檢病毒液。微量板在微量振蕩器上混勻，置37℃溫箱中作用30分鐘后，用定量針頭每孔加入0. 025毫升1%雞紅細(xì)胞懸液，并設(shè)被檢病毒液和雞紅細(xì)胞對(duì)照孔，在微量振蕩器上混勻，置室溫中30分鐘左右判定結(jié)果。如被哪個(gè)HA亞型抗血清所抑制，即可將被檢病毒液定為哪個(gè)亞型。(3)血清診斷可以采取病禽或康復(fù)禽的血清進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)。禽流感的瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)是用禽流感病毒抗原檢測(cè)相應(yīng)的抗體，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所已研制出禽流感的特異性診斷液（凍干抗原)，可供瓊擴(kuò)試驗(yàn)應(yīng)用，方法如下。①瓊脂板的制備。a．0. 01摩／升PBS的配制：甲液：Na2HPO4.12H20 3.58克，加1 000毫升蒸餾水。乙液：KH2 Po4 1.36克，加1 000毫升蒸餾水。待甲、乙二液充分溶解，用脫脂棉過(guò)濾后分別保存，用時(shí)取甲液24毫升加乙液76毫升混合即可。b．制板：o．8克瓊脂糖、8克
氯化鈉加入甲、乙混合液至100毫升，在水浴中煮沸融化后，加入0.01 %硫柳汞，每個(gè)平皿分裝18～20毫升，放人冰箱保存。c．打孔：取出平皿，按7孔一組的
梅花圖形扣孔，孔徑3毫米，孔距4毫米，將孔中的瓊脂挑去補(bǔ)底即成。d.加樣：用注射器或滴管吸取抗原懸液滴人中間孔中，以加滿為止，陽(yáng)性對(duì)照血清分別加入外圍的1孔、4孔中，待檢血清按順序分別加入4個(gè)外圍孔中，每加一個(gè)樣品，應(yīng)更換一個(gè)針頭或滴管。e．加樣完畢后放入溫箱，待抗原及血清滲透人瓊脂中后，將平皿倒過(guò)來(lái)收在保持一定濕度的瓷盤(pán)中，經(jīng)24～48小時(shí)觀察結(jié)果。②觀察結(jié)果。如受檢血清有禽流感抗體，在抗原與抗體孔之間會(huì)產(chǎn)生肉眼清晰可見(jiàn)的沉淀線，沉淀線的一端必須和陽(yáng)性對(duì)照血清沉淀線一端相吻合，即為陽(yáng)性，不出現(xiàn)沉淀線的為陰性。有的受檢樣品產(chǎn)生一條以上的沉淀線，仍屬陽(yáng)性反應(yīng)。
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實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)
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實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)
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