一、常用動脈粥樣硬化動物模型的比較
動脈粥樣硬化模型所用的動物有鼠、兔、豬、狗、猴，依上述理想動物模型的要求最常用的是兔、豬和鼠m.zxtf.net.cn/shouyi/。各種動物誘導方法和形成特征的差異，見表22-1。
表22-1 動脈粥樣硬化模型的種類
| 動物種類 | 疾病誘導方法 | 特征 |
| 鴿 | 自然發(fā)生，或高脂飲食 | |
| 鼠 | 高脂膳食 | 高脂血癥，肥胖 |
| 大白兔 | 高脂膳食 | 高脂血癥，肥胖 |
| 血栓性血管壁損害 | 纖維增厚，粥樣硬化 | |
| 新西蘭兔 | 非剝離性內皮損害 | 細胞纖維內膜增厚 |
| 進行性病變，內膜增厚 | ||
| 豬 | 高脂膳食，壁損害 | 極似人類病變 |
| 狗 | 高脂膳食 | |
| 猴 | 高脂膳食 | 好發(fā)冠狀動脈硬化 |
二、動脈粥樣硬化動物模型制作過程
主要介紹豬和兔兩種動物模型的制作過程。因其容易m.zxtf.net.cn/zhuyuan/獲得、價格便宜、操作簡單，常為首選動物。
1．豬的動物模型
健康雄性中國小型豬，按統(tǒng)計學需要，自定數(shù)量。5～6月齡，稱其體重并記錄，隨機分為實驗組和對照組，每組數(shù)量相等，單籠飼養(yǎng)，對照組只給基礎飼料，實驗組基礎飼料每只動物按25g·kg-1/d分兩次給予，上午在少量基礎飼料中拌入10%蛋黃粉和1.2%膽固醇，待吃完后再添足飼料。每月根據(jù)體重變化情況調整飼料量。兩組均自由攝水。為使動脈粥樣硬化模型更接近人的病變，可采用間接飼養(yǎng)法，于第17周停喂膽固醇和蛋黃粉4周，到第21周再恢復，并不再調整飼料量，直至第29周。
2．兔的動物模型
兔可選日本大白兔或新西蘭白兔（常用作內膜剝脫造型)。8周齡或成年兔，稱其體重記錄，隨機分組，單籠飼養(yǎng)。每日給膽固醇1.5g，上午以少量基礎飼料拌食，待吃完后，再添足基礎飼料（每日每只120g)，對照組則只供基礎飼料，兩組均自由攝水，飼養(yǎng)10周。
以上均為高脂膳食法，此外還有一種較常見的造型法是剝脫內膜法，其操作是選用我國的大耳白兔，每天只給0.5g膽固醇和大油1.5g，蛋黃5g，1周后經(jīng)右股淺動脈，將3.5F球囊擴張導管插至腹主動脈20cm，球囊充液膨脹至2個大氣壓緩慢拉出，反復3次。
三、相關指標檢測
動脈粥樣硬化的模型檢測，大體包括病理形態(tài)學檢查，免疫組織化學檢查以及生化檢查三個方面。
1．病理形態(tài)學觀察
為了對比，豬在14～29周，兔在5～10周，處死兩組動物（每周各一只)，作飼養(yǎng)過程的經(jīng)過觀察。
（1)肉眼觀察主動脈沿縱軸剪開，蘇丹Ⅲ、Ⅳ混合染色，投影格子計數(shù)法分別計算每條主動脈內膜總面積，胸、腹主動脈內膜面積以及蘇丹Ⅲ、Ⅳ染色陽性的脂質條紋及隆起的纖維斑面積，求出各類病變面積百分比。冠狀動脈自心臟剝下，沿縱軸切開，蘇丹Ⅲ、Ⅳ混合液染色，按上述方法計算每條冠狀動脈內膜及其病變面積，求出病變面積百分比。在實驗組（豬)14周時脂質條紋面積和纖維斑面積的百分比分別是9.64%和1.56%左右。冠狀動脈在主支近端1/3處可見纖維斑。
（2)光鏡觀察從胸主動脈和冠狀動脈典型病變處分別取材，常規(guī)石蠟切片，厚4μm，HE染色。用目鏡測微尺于200倍鏡下測量動脈纖維斑或脂質條紋的最大厚度及中膜厚度，求其厚度比值，兩組的值應有顯著的差異。Masson染色片，光鏡下400倍計數(shù)三個視野的腹主動脈和冠狀動脈左前降支纖維斑內胞漿紅染的梭形細胞（視為平滑肌細胞)數(shù)。其值在兩組間亦應有顯著的差異。此外，尚可在實驗組見到內膜缺損或裂隙。
（3)電鏡觀察動脈處死后迅速取材（部位同光鏡)，2.5g戊二醛及1%鋨酸雙重固定，常規(guī)制備樣品，以超薄切片機切片，乙酸鈉，檸檬酸鋁染色，透射電鏡觀察。掃描電鏡樣品經(jīng)逐級酒精脫水，臨界點干燥，鍍膜后觀察。在動物模型組應見到內皮細胞變性壞死脫落，見到髓磷脂小體，細胞間連接變直變寬，內皮下間隙擴大，有較多的平滑肌細胞（SMC)和泡沫細胞。泡沫細胞胞質內密集成群分布的大脂滴和膽固醇結晶，結晶使細胞核移位，胞體腫大，部分泡沫細胞崩解，如圖22-1所示。線粒體腫脹變性，多數(shù)SMC胞漿內充滿大量細胞器（粗面內質網(wǎng)，高爾基體等)。但肌絲成分較少，間質可見彈力纖維增生，細胞外脂質沉積。
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圖22-1 猴大動脈硬化灶電鏡圖
喂飼一年形成的高膽固醇血癥猴的大動脈呈高度動脈粥樣硬化斑塊（fattystreak)表面，內皮細胞呈復雜的凸凹不平。一部分細胞接合分離、巨噬細胞祼落、血小板粘著凝集。
2．免疫組化定性定位觀察
目前市場上有多種免疫組化所需的抗原抗體提供，針對LDL的動脈粥樣硬化斑可采用組化分析，用相應的LDL抗體為第一抗體的PAP法觀察LDL在動脈粥樣硬化病灶內的分布。LDL免疫活性陽性的顆粒主要分布在泡沫細胞周邊，在纖維斑塊內，LDL顆粒呈彌漫性分布，在病灶深部內彈力板附近，有大量LDL顆粒聚集成帶狀。
3．生化指標檢測
在動物飼養(yǎng)全過程中，每周應進行一次血脂測定�？稍诙轨o脈取血或心臟直接抽血。常測指標有血清總膽固醇（TC)，某油三酯（TG)，低密度脂蛋白（LDL)，高密度脂蛋白（HDL)，載脂蛋白AⅠ（ApoAⅠ)，載脂蛋白B（ApoB)等，其動物模型，除ApoAⅠ和HDL外，其他各項指標與對照組比較出現(xiàn)不同程度的升高，尤其以TC、LDL、ApoB最為顯著。此外，血小板膜流動性（PMF)及丙二醛（MDA)也可用作參考指標。
