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動脈粥樣硬化:第一節(jié) 脂蛋白分離的方法學(xué)評價

血漿脂蛋白和脂質(zhì)測定是臨床生化檢驗的常規(guī)測定項目,其臨床意義主要是:①早期發(fā)現(xiàn)與診斷高脂蛋白血癥;②協(xié)助診斷動脈粥樣硬化癥;③評價動脈粥樣硬化疾患如冠心病腦梗塞等危險度;④監(jiān)測評價飲食與藥物治療效果。血漿脂蛋白測定分離的常用方法有超速離心法、沉淀分離…

血漿脂蛋白和脂質(zhì)測定是臨床生化檢驗的常規(guī)測定項目,其臨床意義主要是:①早期發(fā)現(xiàn)與診斷高脂蛋白血癥;②協(xié)助診斷動脈粥樣硬化癥;③評價動脈粥樣硬化疾患如冠心病腦梗塞等危險度;④監(jiān)測評價飲食與藥物治療效果。

血漿脂蛋白測定分離的常用方法有超速離心法、沉淀分離法、電泳分離法及免疫分離法。根據(jù)脂蛋白分離純化或定性定量等不同的需要可以選擇不同的方法,如圖16-1所示。

圖16-1 人血清脂蛋白的電泳和超速離心分離相應(yīng)位置模式及名稱比較圖

一、超速離心法

超速離心法是根據(jù)血漿中各種脂蛋白比重(密度)的差異,在強大離心力作用下進m.zxtf.net.cn/job/行分離純化的一種方法。

血漿在不同密度鹽溶液中經(jīng)過超速離心,各種脂蛋白按密度大小漂浮于不同鹽溶液介質(zhì)中。脂蛋白漂浮的恒量單位是漂浮率(Sf),Gofman等于1950年確定,血漿脂蛋白在比重為1.063的NaCl溶液中(26℃),每秒每達因克離心力的作用下的漂浮速度,稱為1個Svedberg單位(10-13Sf)。Sf越大,脂蛋白密度越低。

一般操作方法是將血漿置于已準備好的不同密度梯度的鹽溶媒介質(zhì)中,在強大離心力作用下,各脂蛋白依其自身在不同分散于相應(yīng)的離心管中的密度梯度同一密度層媒層,達到分離純化的目的。

越速離心m.zxtf.net.cn/sanji/法是分離純脂蛋白的有效技術(shù),目前廣泛應(yīng)用于脂蛋白載脂蛋白代謝的研究中。

二、電泳分離法

不同脂蛋白因蛋白質(zhì)含量不同,其荷電量不同,故可用電泳方法進行分離,并根據(jù)血漿脂蛋白的電泳遷移率不同予以判斷、確認。電泳支持物一般常用醋酸纖維薄膜、瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠。由于醋酸纖維薄膜要予處理,很繁雜,外加電泳時間過長,目前已很少使用。臨床檢驗中主要采用瓊脂糖凝膠電泳進行分離,快而較為準確,儀器設(shè)備要求不高,被廣泛采用。聚丙烯酰胺凝膠作為支持物,分離脂蛋白,分離率高又準確,值得推薦給臨床使用。

電泳分離法,不論用何種支持物,血漿脂蛋白需用親脂染料如蘇丹黑B等進行預(yù)染再電泳,電泳完畢,脂蛋白根據(jù)荷電量不同,其適移率不同,再置于光密度下進行掃描,計算出各種脂蛋白百分比,該數(shù)值乘以血漿總脂量,即可求出α-脂蛋白,β-脂蛋白和前β-脂蛋白含量。乳糜微粒停留在原點,無法測出其含量,正人空腹12h后,血漿中無CM存在。也可將電泳完畢的瓊脂糖凝膠中的脂蛋白區(qū)帶切割置于試管中,加水溶解,進行比色,測出各自百分比,但因其是手工半定量法,難以測準,屬淘汰之列。

三、沉淀分離法

由于脂蛋白的組成及理化性質(zhì)不同,在不同的聚陰離子和2價不同金屬離子(Mn2+、Mg2+、Ca2+、Ni2+、Co2+)以及不同pH值條件下,使脂蛋白與聚陰離子結(jié)合形成復(fù)合物沉淀,以達到分離定量各種脂蛋白的目的,如以肝素錳沉淀劑先沉淀血清中VLDL和LDL,離心,HDL在上清液里,再定量HDL量,即為血漿HDL的量。采用聚乙烯硫酸鹽沉淀LDL,測定血漿的LDL量。

脂蛋白是一種既有蛋白質(zhì),又有膽固醇,還有磷脂的復(fù)合體,如何定量,目前尚無理想的方法,F(xiàn)在以測定脂蛋白中膽固醇總量的方法作為脂蛋白的定量依據(jù)。即測定HDL、LDL或VLDL中的膽固醇,并分別稱為高密度脂蛋白-膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)或極低密度脂蛋白-膽固醇(VLDL-C)。這類測定方法是目前臨床廣泛使用的快速并較為準確的方法。

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