動(dòng)脈粥樣硬化:第二節(jié)　血清堿性蛋白

高載脂蛋白β脂蛋白血癥（hyperapo beta lipoproteinemia ,HyperApoB)屬遺傳性脂代謝紊亂性疾病，以小而致密的低密度脂蛋白（LDL)微粒升高為主要特征，后者是冠心病的重要危險(xiǎn)因素之一。HyperAopB的代謝缺陷為：①肝組織大量合成VLDL，致使小而致密的LDL水平升高；②餐后TG水解延遲，大量游離脂肪酸堆積在血液中。到目前為止，用ApoB基因缺陷或突變無法解釋HyperAopB的各種表型，已發(fā)現(xiàn)來源于該病患者的脂肪細(xì)胞和成纖維細(xì)胞對游離脂肪酸的吸收和代謝存在明顯障礙。Kwiterovich等正常人血清中分離出三種堿性蛋白質(zhì)分子（basicproteins,BPs)-BPⅠ（Mr14.0kD,pI9.10)，BPⅡ(Mr 27.5kD,pI8.48),BPⅢ(Mr55.0kD,pI8.73)，并認(rèn)為BPⅠ同Cianflone等人分離純化的�；�作用剌激蛋白（acylation-stimulating protein,ASP)系 同一種蛋白質(zhì)。同正常人成纖維細(xì)胞相比，BPⅠ使HyperApoB患者成纖維細(xì)胞合成甘油三酯和膽固醇酯的能力下降約50%，而BPⅡ則明顯促進(jìn)患者成纖維細(xì)胞合成膽固醇酯，BPⅢ對這兩種不同來源的成纖維細(xì)胞的代謝沒有影響。然而，與BPⅠ和BPⅡ不同的是，BPⅢ能顯著促進(jìn)正常人單核源性巨噬細(xì)胞合成膽固醇酯。BPⅠ和BPⅡ主要通過蛋白激酶C（PKC)和酪氨酸蛋白激酶（TPK)途徑傳遞信息和發(fā)揮生物效應(yīng)。由于BPs與正常人脂質(zhì)、脂蛋白和游離脂肪酸的代謝以及HyperAopB的病理生理變化密切相關(guān)，受到人們的普遍關(guān)注，尤其是血漿脂質(zhì)代謝與補(bǔ)體系統(tǒng)之間的關(guān)系已成為許多實(shí)驗(yàn)室研究的熱點(diǎn)。

一、血清堿性蛋白質(zhì)的分離及其氨基酸的組成分析

最初在培養(yǎng)離體成纖維細(xì)胞和脂肪細(xì)胞時(shí)，偶然發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基中加入血清可使細(xì)胞甘油三酯（TG)的合成量增加，后來證明這是因?yàn)檠�清中含有一種呈堿性的蛋白質(zhì)分子，根據(jù)這一特性，1988年，Cianflone采用層析法將這種蛋白質(zhì)分離出來，并依據(jù)其生理功能命名為�；�作用剌激蛋白，該蛋白質(zhì)分子量為14.0kD，等電點(diǎn)為9.10。1989年Kwiterovich采用IEF和SDS/PAGE技術(shù)從人血漿中分離純化三種堿性蛋白質(zhì)分子，并測得其分子量和等電點(diǎn)分別為：堿性蛋白Ⅰ（BPⅠ)14.0kD,9.10；堿性蛋白Ⅱ(BPⅡ)27.5kD,8.48；堿性蛋白Ⅲ（BPⅢ)55.0kD.8.73。分析這三種堿性蛋白質(zhì)，發(fā)現(xiàn)他們分別由不同的氨基酸組成：BPⅠ精氨酸的含m.zxtf.net.cn/rencai/量約為BPⅡ、BPⅢ的兩倍，半胱氨酸含量為BPⅢ的三倍；BPⅡ不含半胱氨酸而富含脯氨酸；BPⅢ蛋氨酸的含量是BPⅠ、BPⅡ的2～3倍，而組氨酸的含量只有BPⅠ、BPⅡ的一半，BPⅢ還富含絲氨酸。另外，這三種蛋白質(zhì)都含有較豐富的非極性氨基酸，因此當(dāng)用葡聚糖或聚丙烯酰胺對其進(jìn)行層析法分離時(shí)，觀察到的相反的現(xiàn)象可能是這些氨基酸在水相中相互作用的結(jié)果。而組成該蛋白質(zhì)分子的Asn/Asp和Gln/Glu都以酰胺基團(tuán)形式存在，保證了這些蛋白質(zhì)分子的等電點(diǎn)呈堿性。

Kwiterovich采用免疫印跡分析表明：BPⅠ只能同抗ASP免疫血清發(fā)生特異性反應(yīng)，與免疫前血清無反應(yīng)。而BPⅡ和BPⅢ都能與抗ASP免疫血清和免疫前血清發(fā)生反應(yīng)，因此沒有理由相信BPⅡ和BPⅢ與ASP是同一種物質(zhì)，但Kwiterovich認(rèn)為BPⅠ和ASP為同一種物質(zhì)，因?yàn)樵S多實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示BPⅠ和ASP具有相似的等電點(diǎn)、分子量和氨基酸組成，而且都具有�；�作用激活性，但目前還沒有BPⅠ和ASP分子克隆的結(jié)果證實(shí)這一結(jié)論，見表7-1所示。

表7-1 堿性蛋白Ⅰ和酰化作用剌激蛋白氨基酸組成分析

氨基酸組成分析也證實(shí)BPⅠ和ASP都含有豐富的半胱氨酸，可以憑借其形成二硫鍵產(chǎn)生廣泛的生物學(xué)效應(yīng),一般這些半胱氨酸殘基都以氧化的形式存在,當(dāng)采用含β-巰基乙醇的緩沖液來純化ASP時(shí),其生物活性會(huì)完全喪失,可見半胱氨酸的存在對維持其�；�作用剌激活性很有必要.現(xiàn)已證明，BPⅠ、BPⅡ、BPⅢ的生理功能不同于膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（sterol carrier protein ,SCP)和脂肪酸連結(jié)蛋白（fatty-acidbinding protein ,FABP)，也不同于其他堿性蛋白如髓鞘堿性蛋白（MBP)。

二、血漿堿性蛋白對細(xì)胞脂質(zhì)代謝的影響

堿性蛋白Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ都具有�；�剌激活性，能剌激成纖維細(xì)胞合成TG，膽固醇酯（ChE)和磷脂（PL)。1994年，Peter分別采集了6個(gè)健康成人和6個(gè)家族性高載脂蛋白β脂蛋白血癥患者的成纖維細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞脂質(zhì)代謝的研究：在正常人培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞中，BPⅠ、BPⅡ和BPⅢ分別使其細(xì)胞內(nèi)甘油三酯（TG)的含量增加2、1.5和1.4倍；但在HyperApoB患者成纖維細(xì)胞中，BPⅠ的作用下降了50%，而BPⅡ和BPⅢ仍能發(fā)揮其有效的�；�作用剌激活性。

在正常成纖維細(xì)胞，BPⅠ也有剌激膽固醇酯合成的能力，而在HyperApoB患者成纖維細(xì)胞，BPⅠ的這種作用基本上消失了。但BPⅡ能使HyperApoB患者成纖維細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯的含量異常升高至正常細(xì)胞含量的六倍，而且BPⅡ?qū)δ懝檀减ズ涂偰懝檀嫉挠绊懯瞧叫械�，游離膽固醇未發(fā)現(xiàn)有何變化。BPⅠ還可使正常細(xì)胞總磷脂含量升高約兩倍，而在HyperApoB患者成纖維細(xì)胞，BPⅠ對磷脂的合成代謝影響甚微，只相當(dāng)于正常細(xì)胞約三分之一的能力。

已有研究表明，未用堿性蛋白（BPs)處理的正常細(xì)胞和HyperApoB患者細(xì)胞，其脂質(zhì)代謝無顯著性差異，表明堿性蛋白（BPs)的作用機(jī)制可能是加速細(xì)胞合成脂質(zhì)或抑制細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的水解。Teng等發(fā)現(xiàn)在正常人脂肪細(xì)胞，ASP（或BPⅠ)的作用是促使甘油三酯（TG)合成增加而不是抑制了細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的水解，同樣，在HyperApoB患者脂肪細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的減少不是由于（BPⅠ)使甘油三酯水解增加而是使其合成減少。因此Kwiterovich認(rèn)為BPⅠ促進(jìn)正常細(xì)胞合成甘油三酯，而HyperApoB由于存在某些缺陷限制了BPⅠ的�；�剌激活性。

三．不同脂質(zhì)、脂蛋白和LDL-ApoB濃度下堿性蛋白對細(xì)胞代謝的影響

Kwiterovich 選擇正常人和家族性高載脂蛋白β脂蛋白血癥患者成纖維細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，分別觀察堿性蛋白Ⅰ、Ⅱ在不同脂質(zhì)、脂蛋白和LDL-ApoB濃度下對細(xì)胞油酸代謝的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)BPⅠ剌激油酸轉(zhuǎn)化為甘油三酯的比率與血漿總膽固醇、甘油三酯、LDL-C和LDL-ApoB水平呈顯著性相關(guān)（P＜0.01)，同血漿高密度脂蛋白濃度正相關(guān)（P＜0.05)，相似的關(guān)系也見于油酸轉(zhuǎn)化為膽固醇酯的過程中。因此認(rèn)為BPⅠ可能影響HyperApoB的病理生理過程，對各種表型的形成起重要作用。如總膽固醇、甘油三酯、LDL-ApoB濃度越高，則高密度脂蛋白濃度越低。而Cianflone則認(rèn)為，除了家族性高膽固醇血癥，�；�作用剌激蛋白（ASP)誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞合成甘油三酯的量與血漿低密度脂蛋白水平呈負(fù)相關(guān)，與血漿高密度脂蛋白和極低密度脂蛋白水平無關(guān)。

同BPⅠ相反，BPⅡ誘導(dǎo)膽固醇酯合成的量同血漿總膽固醇、LDL-C和LDL-ApoB的濃度呈顯著性正相關(guān)（P＜0.01)，同血漿高密度脂蛋白水平呈負(fù)相關(guān)（P=0.06)，同血漿甘油三酯的濃度有正相關(guān)趨勢（P=0.01)。同樣，BPⅡ剌激高載脂蛋白β脂蛋白血癥患者成纖維細(xì)胞合成膽固醇酯的能力與血漿高水平的LDL-C和LDL-ApoB密切相關(guān)，血漿高水平的LDL-C和LDLApoB為BPⅡ促進(jìn)膽固醇的大量酯化創(chuàng)造了良好的條件。堿性蛋白Ⅱ（BPⅡ)可能以不同于堿性蛋白Ⅰ（BPⅠ)的方式影響血漿LDL濃度：BPⅠ主要通過影響外周細(xì)胞（如脂肪細(xì)胞)而發(fā)揮生物效應(yīng)，因?yàn)樵贖yperApoB患者外周細(xì)胞對游離脂肪酸的轉(zhuǎn)化降低；而BPⅡ則促進(jìn)肝組織對游離脂肪酸的吸收并剌激肝細(xì)胞合成分泌載脂蛋白B。

堿性蛋白Ⅲ（BPⅢ)能顯著剌激單核細(xì)胞源性巨噬細(xì)胞合成膽固醇酯，而對甘油三酯的代謝無影響。BPⅠ和BPⅡ?qū)�單核源性巨噬�?xì)胞的甘油三酯和膽固醇的代謝沒有影響，表明堿性蛋白生物效應(yīng)可能具有細(xì)胞特異性。

四、�；�作用剌激蛋白與細(xì)胞的連結(jié)

同正常人成纖維細(xì)胞一樣，�；�作用剌激蛋白（ASP)能明顯促進(jìn)家族性高膽固醇血癥和LDL-ApoB水平正常的IV型高脂蛋白血癥患者的成纖維細(xì)胞合成甘油三酯，并且ASP與成纖維細(xì)胞結(jié)合具有一定的特異性，結(jié)合曲線可呈飽和狀態(tài)，表明家族性高膽固醇血癥和LDLApoB水平正常的IV型高脂蛋白血癥患者，同正常細(xì)胞一樣具有同一類ASP受體，而且該受體的最大親和力與正常對照組基本一致。

研究表明，ASP與正常細(xì)胞和HyperApoB細(xì)胞連結(jié)的典型曲線為矩形雙曲線。Scatcharel線性回歸分析表明，正常細(xì)胞的斜率為-0.068±0.01(μg/ml)^-1而HyperApoB患者細(xì)胞的斜率為-0.08±0.02(μg/ml)^-1統(tǒng)計(jì)學(xué)無顯著性差異，而HyperApoB細(xì)胞x軸截距只相當(dāng)于正常細(xì)胞的一半這些結(jié)果表明，ASP與正常細(xì)胞和HyperApoB患者細(xì)胞表面受體的連結(jié)都呈單級式，kD值為1.05×10^-6M，只是HyperApoB細(xì)胞表面受體下降了一半。但有研究表明，只有約50%的HyperApoB患者細(xì)胞存在這種缺陷，且此種缺陷與高脂血癥的嚴(yán)重程度無關(guān)。Babirak則認(rèn)為脂蛋白脂肪酶的活性缺失也可能導(dǎo)致高載脂蛋白β脂蛋白血癥，而并未發(fā)現(xiàn)該患者的外周細(xì)胞表面的酰化剌激蛋白受體有所減少。

同胰島素相比，ASP可能更有促進(jìn)脂肪組織合成甘油三酯的潛力，對餐后脂肪酸的分布發(fā)揮其重要作用。ASP調(diào)節(jié)外周脂肪組織吸收脂肪酸合成甘油三酯，迅速解除游離脂肪酸對脂蛋白脂肪酶（LPL)活性的抑制，促使LPL更有效地水解餐后升高的甘油三酯，并改善LPL對富含甘油三酯的脂蛋白的清除，而HyperApoB患者由于細(xì)胞膜ASP受體數(shù)目降低，外周組織不能有效地利用血漿中的脂肪酸和葡萄糖，致使大量脂肪酸重新分布到肝組織，剌激肝細(xì)胞合成并分泌大量ApoB，裝配VLDL和LDL。

五、堿性蛋白的信使傳遞途徑

堿性蛋白Ⅰ和堿性蛋白Ⅱ可能是通過第二信使系統(tǒng)介導(dǎo)而影響細(xì)胞甘油三酯和膽固醇酯的代謝。Peter選擇蛋白激酶C（PKC)的激活劑和抑制劑來研究BPⅠ、BPⅡ的作用途徑，H-7是PKC較為有效的抑制劑，其作用是參與ATP競爭而不是與Ca²⁺或磷脂相互作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，H-7抵消了HyperApoB患者細(xì)胞對BPⅠ的反應(yīng)性，而且HyperApoB患者細(xì)胞對BPⅡ異常反應(yīng)也被高濃度的H-7所遏制。在缺乏BPs時(shí)，PKC的激活劑C：8能同樣有效地剌激正常細(xì)胞和HyperApoB患者細(xì)胞，表明在HyperApoB細(xì)胞，經(jīng)甘油二酯（DG)途徑激活PKC的過程無異常。但當(dāng)BPs存在時(shí)，HyperApoB細(xì)胞的代謝缺陷并不因?yàn)镻KC的激活劑C：8的出現(xiàn)而有所改善，所以HyperApoB的代謝缺陷不是在DG-PKC途徑，而在第二信使系統(tǒng)的其他環(huán)節(jié)上。

Baldo也認(rèn)為ASP是通過蛋白激酶C（PKC)途徑介導(dǎo)而發(fā)揮生物效應(yīng)的，因?yàn)镻KC的激活劑豆寇酰fo波乙酯（PMA)和1-油�；�-2-乙酰-rar-甘油（OAG)能模擬ASP的生物效應(yīng)，當(dāng)成纖維細(xì)胞對PMA和OAG的反應(yīng)性處于飽和狀態(tài)時(shí)，改變培養(yǎng)基中的ASP濃度，并不能使甘油三酯的合成增加；PKC特異性抑制劑星形孢菌素Cal-phostinC和GF109203x也可完全抑制ASP的生物活性；ASP可使細(xì)胞內(nèi)DG合成增加，而DG是PKC的有效激活劑；ASP激活PKC從胞漿轉(zhuǎn)位到細(xì)胞膜，使細(xì)胞膜對脂肪酸的吸收和葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)增加。

為了進(jìn)一步明確HyperApoB患者的細(xì)胞變異環(huán)節(jié)，1995年，Kwiterovich采用染料木黃酮（genistein)作為探針來研究正常細(xì)胞和HyperApoB患者細(xì)胞對BPⅠ的反應(yīng)性。結(jié)果顯示木黃酮存在時(shí)正常細(xì)胞和HyperApoB患者成纖維細(xì)胞的脂質(zhì)代謝存在明顯差異，可以推測酪氨酸蛋白激酶（TPK)的磷酸化在HyperApoB病理生理過程中扮演重要角色，且這一現(xiàn)象也被其他兩種TPK抑制作用所證實(shí)（herbimycwww.med126.cominA和tryphostinA₄₇)。

在缺乏BPⅠ的F-12培養(yǎng)基中補(bǔ)充木黃酮（92.5nmol/ml)，正常細(xì)胞甘油三酯含量下降10%，而HyperApoB患者成纖維細(xì)胞中總膽固醇和非酯化膽固醇含量下降25%。正常成纖維細(xì)胞和HyperApoB患者成纖維細(xì)胞中總膽固醇和非酯化膽固醇的量都顯著減少，且HyperApoB患者成纖維細(xì)胞這兩種脂質(zhì)下降更顯著，還沒有發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯有何變化。當(dāng)用BPⅠ和木黃酮（或者h(yuǎn)erbimycinA、tryphostinA₄₇)處理培養(yǎng)基后，正常細(xì)胞合成甘油三酯的量與只用BPⅠ處理HyperApoB細(xì)胞合成甘油合成甘油三酯的量一致。這些現(xiàn)象表明，BPⅠ的生物活性，是通過位于細(xì)胞膜上TPK所介導(dǎo)的HyperApoB細(xì)胞，對BPⅠ反應(yīng)性缺失，由于TPK的磷酸化為一些TPK的抑制劑所阻斷，經(jīng)木黃酮處理的正常細(xì)胞和HyperApoB細(xì)胞仍對BPⅠ有一些殘余反應(yīng)，其機(jī)理有待進(jìn)一步探討。

非受體型TPK包括SH₂和SH₃兩個(gè)功能域，通過磷酸化作用，激活跨膜受體TPK，實(shí)際上SH₂和（或)SH₃蛋白是磷脂酶C-r（PLC-r)、ras-GTP酶活化蛋白（ras GAP)和磷脂酰肌醇3激酶（pI-3K)的同系物，其功能是裂解4，5二磷脂酰肌醇為DG和三磷酸肌醇（IP₃)，因此這些SH₂和SH₃蛋白也具有TPK活性，并放大TPK的信號，最終將其傳到核內(nèi)的轉(zhuǎn)錄機(jī)構(gòu)，以調(diào)節(jié)特定基因的表達(dá)或通過改變細(xì)胞內(nèi)蛋白的功能狀態(tài)，使細(xì)胞的代謝水平發(fā)生變化，已證實(shí)HerbimycinA直接抑制PLC-r。因此，HyperApoB的細(xì)胞缺陷可能存在于跨膜受體TPK，也可能存在于原型細(xì)胞質(zhì)信號蛋白的識(shí)別和結(jié)合方式。

從目前的資料來看，木黃酮對BPⅠ生物活性的抑制不是通過降低HMGCoA還原酶的活性而實(shí)現(xiàn)的，因?yàn)槟军S酮能抑制甲羥戊酸內(nèi)酯轉(zhuǎn)變成非酯化膽固醇，而不能抑制HMGCoA還原酶的磷酸化。Sato已經(jīng)闡明HMGCoA還原酶的磷酸化可降低其催化能力，如果木黃酮抑制了HMGCoA還原酶的磷酸化，那么將使膽固醇的生物合成增加而不是降低，但是這樣無法解釋經(jīng)木黃酮處理的正常成纖維細(xì)胞和HyperApoB細(xì)胞內(nèi)總膽固醇和非酯化膽固醇的量顯著減少而膽固醇酯的變化不大的現(xiàn)象。

六、脂肪信號Adipsin-ASP系統(tǒng)

1983年，Spiegelman用梯度凝膠電泳和Northern雜交技術(shù)檢測培養(yǎng)的鼠3T₃脂肪細(xì)胞和前脂肪細(xì)胞總mRNA水平時(shí)，發(fā)現(xiàn)脂肪細(xì)胞較前脂肪細(xì)胞多三條特異的mRNA帶，其中adipsin mRNA是分化的脂肪細(xì)胞所特有的，尤其在鼠的白色和褐色脂肪組織adipsinmRNA水平分別下降75%和68%，在胰島素缺失的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭�，adipsin mRNA水平增加2～3倍，而在遺傳性肥胖實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭�，脂肪組織adipsin mRNA水平降低96%～99%。許多研究表明，adipsin是一種絲氨酸蛋白酶，由脂肪組織和坐骨神經(jīng)產(chǎn)生，存在于循環(huán)血液中。Rosen用酶分析認(rèn)為adipsin具有補(bǔ)體因子D的活性，而抗體中和試驗(yàn)也強(qiáng)烈提示鼠adipsin是人補(bǔ)體因子D僅有的同系物，White采用氨基酸序列分析表明adipsin同絲氨酸蛋白酶家族中主要成員有30%同源性，而與人補(bǔ)體因子D有60%同源性，而且經(jīng)重組的adipsin可能替代補(bǔ)體因子D激活補(bǔ)體旁路途徑。另外還發(fā)現(xiàn)，在肥胖型老鼠的血液中，補(bǔ)體因子D的活性也隨著adipsin mRNA的水平下降而降低。最近White對人adipsin mRNA的成功克隆最終證實(shí)了adipsin和補(bǔ)體因子D為同一種物質(zhì)。

在脊椎動(dòng)物，補(bǔ)體系統(tǒng)是主要免疫防御體系之一。外來微生物的溶解是通過激活了抗體依賴性補(bǔ)體激活途徑或抗體非依賴性補(bǔ)體激活途徑來實(shí)現(xiàn)的，這兩種激活途徑都可形成裂解成孔復(fù)合體（lytic pore complex)，破壞感染的細(xì)胞膜成分，導(dǎo)致細(xì)胞的裂解。我們知道，大多數(shù)補(bǔ)體蛋白都是由肝細(xì)胞和免疫細(xì)胞合成的，而脂肪組織特異性蛋白酶adipsin是人補(bǔ)體因子D的同系物，說明補(bǔ)體旁路激活與脂肪細(xì)胞的生物學(xué)行為間存在某種聯(lián)系，受這一結(jié)果的啟發(fā)，Lisa終于取得令人滿意的結(jié)果：脂肪細(xì)胞和脂肪組織，還可合成補(bǔ)體旁路激活途徑中的另外兩個(gè)關(guān)鍵補(bǔ)體因子C₃和B，表明脂肪組織在局部的免疫防御反應(yīng)中起有重要的作用。SDSPAGE分析表明，補(bǔ)體因子B和D由一條多肽鏈組成，而C₃由兩條鏈組成，C_3α（110kD)和C_3β（70kD)之間由二硫鍵相連。將因子C₃、B和adipsin/D放在一起孵育發(fā)現(xiàn)，adipsin/D將因子B酶解為B_a和B_b，因子B_b與C₃相連形成C₃轉(zhuǎn)化酶，將C₃裂解為C_3α（110kD)和C_3α（9kD)。過敏毒素C_3α可能改變血管的通透性和收縮性，是一種趨化性細(xì)胞因子，能誘導(dǎo)單核細(xì)胞釋放IL-1，B_a和B_b，調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞的生長，B_b還誘導(dǎo)人單核細(xì)胞的擴(kuò)展，抑制單核細(xì)胞的遷移。

ASP是一個(gè)更具潛力的脂肪酸�；�剌激因子，他誘導(dǎo)TG合成具有雙重效應(yīng)：其一，ASP誘導(dǎo)葡萄糖經(jīng)細(xì)胞器運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞表面，使細(xì)胞膜對葡萄糖特異性轉(zhuǎn)運(yùn)增加，盡管細(xì)胞膜對脂肪酸的轉(zhuǎn)運(yùn)是由ASP間接引起的，但細(xì)胞對脂肪酸凈吸收量的增加激活了甘油三酯合成的限速酶-甘油二酯�；�轉(zhuǎn)移酶：其二，ASP實(shí)際上是補(bǔ)體C₃的一個(gè)片段，命名為C_3αdesArg，他具有調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)甘油三酯合成的功能。

1993年，Baldo對ASP進(jìn)行了氨基酸組成、分子量和N-端氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)，ASP和C_3α的氨基酸組成非常接近，只是C_3α比ASP多一個(gè)精氨酸，且N-端氨基酸序列均為N-Ser-Val-Gln-Leu-Thr-Glu-Lys-Arg-Met-ASP，離子噴射電離技術(shù)也證實(shí)ASP的質(zhì)量單位（8933±0.3)與C_3αdesArg（8932.5)一致，而不同于C_3α（9088.7).

在血漿羧肽酶的作用下，C_3α羧基未端Arg很容易被水解掉而形成C_3αdesArg，盡管C_3αdesArg曾被認(rèn)為是C₃的非活性產(chǎn)物，只有過敏毒素的作用，然而目前的資料已顯示C_3αdesArg確實(shí)能夠促進(jìn)細(xì)胞甘油三酯的合成。

已經(jīng)明確，ASP能剌激成纖維細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和HepG₂細(xì)胞合成TG，且對分化的脂肪細(xì)胞影響最大，膽仍沒有證據(jù)表明ASP對脂質(zhì)水解有何影響，因?yàn)镠yperApoB細(xì)胞TG的含量下降是由于該細(xì)胞對ASP的反應(yīng)性下降而非細(xì)胞內(nèi)TG的水解增加所致。但Cianflone在分子水平利用RT-PCR技術(shù)檢測了甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAP)、脂蛋白脂肪酶、adipsin、因子C₃和因子b mRNA水平與ASP（C_3α-desArg)之間的關(guān)系后發(fā)現(xiàn)，成纖維細(xì)胞和未分化的前脂肪細(xì)胞只能合成微量ASP，而分化的脂肪細(xì)胞在相同時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生大量ASP（是前者的8倍)；成纖維細(xì)胞和分化的脂肪細(xì)胞內(nèi)GAp mRNA水平無差異，而LDL mRNA在分化的脂肪細(xì)胞內(nèi)明顯增加，其意義有待進(jìn)一步探索。另外，分化的脂肪細(xì)胞內(nèi)因子C₃和adipsin mRNA水平異常升高，因子B mRNA水平只略有升高，這些變化與ASP（C_3α-desArg)大量增加平行。

因此，adipsin/D-ASP/C_3α-desArg系統(tǒng)可能具有非常重要的生理意義。當(dāng)脂肪組織對脂肪酸的攝取能力下降時(shí)，大量脂肪酸滯留于血漿中，LPL的活性則受到嚴(yán)重抑制，不能有效水解血漿中的TG，而Adipisn-ASP系統(tǒng)可以上調(diào)脂肪組織對血漿游離脂肪酸的吸收率，使血漿中游離脂肪酸的水平不致于上升到有害的程度，LPL也能充分發(fā)揮其有效的生物活性，水解血漿中的TG和富含TG的脂蛋白，有效地調(diào)節(jié)甘油三酯的水解和合成。

七、HyperApoB的病理生理

HyperApoB是Sniderman分析了大量臨床資料后于1980年首先提出的，該患者脂代謝紊亂的主要表現(xiàn)是血ApoB和LDL水平升高，LDL-C同LDL-ApoB之比明顯降低。據(jù)Montreal心臟研究中心對100例HyperApoB合并冠狀動(dòng)脈粥樣硬化患者實(shí)施主動(dòng)脈-冠狀動(dòng)脈搭橋術(shù)后，十年隨訪結(jié)果顯示：血清LDL-ApoB水平升高和HDL-ch水平降低是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化病變進(jìn)展的兩個(gè)最有價(jià)值的指標(biāo)，不管是發(fā)生在原位冠狀血管，還是在隱靜脈旁路移植塊。Brown等對血清LDL≥72.5μmol/L、有冠狀動(dòng)脈搭橋術(shù)史和早發(fā)冠心病的遺傳背景的患者采用控制飲食和降低脂質(zhì)相結(jié)合的治療方案。結(jié)果表明：當(dāng)血清LDL-ApoB的濃度下降時(shí)，冠狀動(dòng)脈內(nèi)的粥樣斑塊也隨之消退。

正常人的LDL是一類非均質(zhì)的大分子物質(zhì)，密度為1.019～1.063kg/L,HyperApoB患者LDL的分子量小于2.0×10⁶D，直徑僅有23nm,Sf值也小于5.0，而密度則高達(dá)1.055kg/L，該患者LDL組成分析表明，膽固醇酯的含量明顯降低，ApoB含量明顯升高，而甘油三酯、磷脂和非酯化膽固醇含量基本不變。另外，HyperApoB患者往往合并血清Lp（α)水平升高，而PROCAM研究中心則認(rèn)為血清Lp（α)水平與ApoB或ApoA-Ⅰ的濃度變化無關(guān)。

大量研究顯示HyperApoB患者體內(nèi)LDL受體活性是正常的，并認(rèn)為LDL-ApoB的增加是大量VLDL-ApoB的繼發(fā)性改變。于是，許多實(shí)驗(yàn)室開始研究HyperApoB患者ApoB的分子或基因變異情況，Gavish應(yīng)用ApoB的單克隆抗體封閉ApoB的某種抗原點(diǎn)位，發(fā)現(xiàn)LDL-ApoB的濃度。但大規(guī)模遺傳連鎖分析還沒有確認(rèn)HyperApoB患者同ApoB基因所在染色單體之間的關(guān)系，而且Johns Hopkins冠心病研究小組也沒有發(fā)現(xiàn)ApoB的影響變異與HyperApoB之間存在某種密切關(guān)系。

從目前資料來看，ApoB的基因變異或缺失似乎對HyperApoB的影響甚微，無法解釋HyperApoB的各種表型。已發(fā)現(xiàn)HyperApoB每一種表型都存在于兩種代謝障礙。其一，肝組織大量合成VLDL，致使致密的LDL水平升高，Teng用ApoB的單克隆抗體分別封閉致密和疏松的LDL微粒，發(fā)現(xiàn)致密的LDL與LDL之間向乎無反應(yīng)，而疏松的LDL微粒與LDL受體之間的高親和力下降，致使LDL表面的ApoB重新分布。來自動(dòng)物體內(nèi)和體外的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證實(shí)疏松的LDL很容易從血液循環(huán)中清除，而致密LDL常需要很長時(shí)間。Kwiterovich認(rèn)為致密LDL可能通過清道夫受體途徑從血液中清除，這種代謝方式將促成動(dòng)脈粥樣硬化的形成和膽固醇酯在血管壁的沉積，但研究結(jié)果出乎意料，來源于HyperApoB患者體內(nèi)的LDL并不能促進(jìn)正常人或HyperApoB患者單核源性巨噬細(xì)胞大量合成膽固醇酯。而且Knight等也沒有發(fā)現(xiàn)單核源性巨噬細(xì)胞優(yōu)先吸收和降解HyperApoB患者的致密LDL。其二，從飲食中攝入的脂肪經(jīng)乳糜途徑延遲，血中游離脂肪酸的濃度明顯升高。Sniderman等的研究表明脂肪細(xì)胞和成纖維細(xì)胞攝取游離脂肪酸合成甘油三酯的能力下降，可能是血中游離脂肪酸水平升高的主要原因，而游離脂肪酸則誘導(dǎo)肝細(xì)胞合成和分泌裝配VLDL的載脂蛋白B。

由于血清堿性蛋白與脂代謝密切相關(guān)，而HyperApoB的發(fā)病機(jī)制又無法從ApoB的基因變異、LDL受體和清道夫受體水平上找到合理的解釋，許多實(shí)驗(yàn)室已將目光轉(zhuǎn)入血清堿性蛋白質(zhì)的研究上，并試圖解開HyperApoB的發(fā)病機(jī)制。盡管目前的研究水平仍停留在對堿性蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的探討上，但Kwiterovich已根據(jù)現(xiàn)有的研究成果，對HyperApoB的生化特征從堿性蛋白質(zhì)及其受體的角度作出了大膽的假設(shè)，如圖7-3所示。

圖7-3 HyperApoB病理假說圖解

綜上所述，三種血清堿性蛋白質(zhì)所具有酰化剌激活性確實(shí)為我們進(jìn)一步認(rèn)識(shí)血漿脂質(zhì)、脂蛋白和游離脂肪酸的代謝及HyperApoB的致病機(jī)制提供了新的視野，但其確切的生化機(jī)制有待進(jìn)一步闡明。血清堿性蛋白質(zhì)與補(bǔ)體系統(tǒng)之間的關(guān)系。以及堿性蛋白的組織特異性仍將是今后研究的重點(diǎn)。