細(xì)胞和分子免疫學(xué):第二節(jié)　補(bǔ)體調(diào)節(jié)分子的結(jié)構(gòu)及功

補(bǔ)體系統(tǒng)的激活為一種級(jí)聯(lián)反應(yīng)，但受到多種調(diào)節(jié)分子的嚴(yán)格控制，其反應(yīng)的程度和單一成分的反應(yīng)都是在生物反饋近代制下而進(jìn)行的，從而限制了活化的擴(kuò)大化，以維持補(bǔ)體水平的平衡。調(diào)節(jié)作用包括兩個(gè)方面，即自身衷變失活及一些抑制物的滅活作用。前者指已活化的補(bǔ)體分子均不穩(wěn)定，如不及時(shí)與靶細(xì)胞膜結(jié)合即迅速衰變失活；后者是通過(guò)抑制物的作用而使已活化的分子失去活性。這一節(jié)中僅涉及后一個(gè)方面。

一、C1抑制物

C1抑制物（C1INH)是血清中高度糖基化的一種蛋白質(zhì)，含糖量高達(dá)35-49%。最初由Ranoff和lepow(1957)所發(fā)現(xiàn)，稱其為C1酯酶抑制劑，與引同時(shí)Schultze等則將其稱為α2神經(jīng)氨酸糖蛋白。C1INH為一單鏈分子，由478個(gè)氨基酸殘基組成，分子量為104kDa，由478個(gè)氨基酸殘基組成，分子量為140kDa，鏈內(nèi)有兩對(duì)二硫鍵（圖5-13)。C1INH調(diào)節(jié)的主要方式是，與活化的C1r或C1s結(jié)合形成穩(wěn)定的復(fù)合物而導(dǎo)致C1絲氨酸蛋白酶失活。其作用機(jī)理是，C1INH通過(guò)提供一個(gè)酷似C1r或C1s的正常底物的序列為“銹鉺”（“bait”)，被c 1r或C1s裂解暴露出一個(gè)活性部位，然后再與C1r或C1s結(jié)合形成共價(jià)的酯鍵而發(fā)揮抑制作用。此外，C1INH還可防止在缺乏抗體時(shí)，C1以很低但仍有一定速率出現(xiàn)的自發(fā)激活。正常情況下，血液中的大多數(shù)C1可被7倍于其克分子濃度的C1INH所結(jié)合，以防止C1由于構(gòu)象改變而引起的自發(fā)激活。但C1同抗原、抗體復(fù)合物的結(jié)合，可使C1從C1INH的抑制作用中而獲釋。除上述作用外，C1INH還可抑制凝血因子Ⅻa、Ⅺa、激肽釋放酶及纖溶酶，因而其在凝血、激肽和纖溶系統(tǒng)中也有重要的調(diào)節(jié)作用。

經(jīng)對(duì)C1INH cDNA序列的分析發(fā)現(xiàn)，C1INH與其它幾種絲氨酸蛋白酶抑制物（serpin)超家族成員（α1抗胰蛋白酶、α1抗糜蛋白酶及抗凝血酶Ⅲ等)約有30%的氨基酸同源性，物別是在C端的120個(gè)氨基酸。C1INH的編碼基因定位于第11號(hào)染色體的短臂11.2～長(zhǎng)臂13亞區(qū)。C1INH先天性缺陷時(shí)，可導(dǎo)致遺傳性血管神經(jīng)性水腫（hereditary angioneurotic edema,HAE)。近年報(bào)道應(yīng)用C1INH濃縮劑防治HAE效果良好，但尚未廣泛用于臨床。

圖5-13　C1 INH分子的結(jié)構(gòu)模式圖

注：（a)為電鏡觀察模式圖

（b)為中子散射模式圖

（c)為園二色譜分析的二級(jí)結(jié)構(gòu)模式圖

二、C4結(jié)合蛋白

C4結(jié)合蛋白（C4bp)是一種含量豐富的可溶性血清糖蛋白，分子量為550kDa，1977年由Ferreira等所報(bào)道。其分子結(jié)構(gòu)模式現(xiàn)多以Dahlback等（1983)描述的“蜘蛛樣”（spiderlike)結(jié)構(gòu)來(lái)分析其結(jié)構(gòu)及功能。C4bp由8個(gè)亞單位組成，電鏡下觀察形似蜘蛛，其中有7條分子量相同（均為70kDa)的長(zhǎng)鏈（α鏈)，由549個(gè)氨基酸殘基組成，鏈間以二硫鍵相連結(jié)，并共同氨基酸殘基組成，鏈間以二硫鍵相連結(jié)，并共同連結(jié)于一中心體。α鏈含有8個(gè)SCR，其N端是其頭部，為與C4b相結(jié)合的部位，可能位于第332-395位氨基本酸殘基。第8條鏈（β鏈)較短（45kDa)由235個(gè)氨基酸殘基組成，含有4個(gè)SCR為與蛋白S（PS)相結(jié)合的部位（圖5-14)。C4bp以兩種方式抑制補(bǔ)體的活化。第一種方式是，通過(guò)其與C2競(jìng)爭(zhēng)C4b，而從c 4b2a中取代C2a，并通過(guò)其與C4b的結(jié)合而陰止剩余的C2同C4b結(jié)合，由此抑制C3轉(zhuǎn)化酶的形成。C4bp與C4b的結(jié)合能力與細(xì)胞表面C4b分子的數(shù)成正比，且較C2同C4b的結(jié)合能力高27倍。第二種方式是，C4bp作為I因子的一種輔助因子，促進(jìn)I因子對(duì)C4b的裂解。有C4bp存在時(shí)，I因子可將C4b的a`鏈完全裂解；無(wú)C4pb時(shí)，I因子的裂解作用不完全。其與I因子結(jié)合的活性部位位于第177-322位氨基酸殘基區(qū)域。PS與C4pb的第8條鏈（β鏈)結(jié)合，不影響C4bp同C4b的結(jié)合，但可延長(zhǎng)C4bp的半衷期，從而強(qiáng)化C4bp的抑制作用。

圖15-14　C4bp的結(jié)構(gòu)（模式圖)

C4bp基因定位于人的第1號(hào)染色體長(zhǎng)臂32區(qū)，同CR1、CR2、H因子、MCP及DAF等的基因相連鎖，并均含有數(shù)目不同的SCR。

三、促衰變因子（CD55)

促衰變因子（decayaccelerating factor,DAF)是Nicholson-Weller等（1981)用正丁醇提取后，再以層析法從人和豚鼠紅細(xì)胞基質(zhì)中純化的一種膜蛋白。因其具有促進(jìn)C3轉(zhuǎn)化酶衷變的活性故名。經(jīng)在還原條件下做SDS-PAGE并以過(guò)碘酸-Schiff試劑染色表明，純化的DAF為單鏈膜糖蛋白。人和豚鼠的DAF分了量不同分別為70kDa和60kDa�，F(xiàn)已按白細(xì)胞分化抗原將其歸為CD55。Davitz等（1986)通過(guò)用磷脂酰肌醇（PI)特異性的磷脂酶C（PI-PLC)處理人外周血細(xì)胞可釋放DAF的事實(shí)探明，DAF是經(jīng)糖磷脂酰肌醇（glycosylphodphatidylinositol,GPI)錨而固定于細(xì)胞膜中的。即糖蛋白的C末端共價(jià)結(jié)合于含PI的糖磷脂上，再經(jīng)PI插入細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的外層小葉中。研究表明，膜DAF的遷移率接近于膜類脂的遷移率，比大多數(shù)膜蛋白遷移率高一個(gè)數(shù)量級(jí)。認(rèn)為這有助于促進(jìn)數(shù)目有限的膜DAF分子與細(xì)胞表面大量的C3b或C4b片段接觸。另外DAF的糖磷脂酰肌醇結(jié)構(gòu)還可能具有轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞信號(hào)的作用。

除Nicholson-Weller等證實(shí)的分子量為70kDa的膜DAF外，Kinoshita等（1987)用Western blotting在人紅細(xì)胞表面還檢出分子量為140kDa的一種膜DAF，稱其為DAF-2。DAF-2在膜上的數(shù)目不足70kDa膜DAF的1/10，但也有促進(jìn)C3b轉(zhuǎn)化酶衰變的活性，也含有GPI錨結(jié)構(gòu)。由于DAF-2的分子量較70kDa的膜DAF大一倍，提示其為膜DAF的二聚體，但用二巰基乙醇或以SDS使基變性，都不能將DAF-2裂解成兩個(gè)成分，故DAF-2的精確結(jié)構(gòu)仍有待進(jìn)一步闡明。另外，近年應(yīng)用兩位點(diǎn)RIA測(cè)定法，在血漿、尿液、淚液、唾液、滑膜液和腦脊液，以及組織培養(yǎng)上清中均檢出可溶性的DAF（sDAF)，水平的40-400ng/ml范圍。并發(fā)現(xiàn)尿液中的sDAF分子量略低于紅細(xì)胞上膜DAF的分子量，疏水性也較膜DAF小，其抑制細(xì)胞表面C3轉(zhuǎn)化酶內(nèi)在裝配的活性較膜DAF約低100倍，但仍具有促進(jìn)已形成的C3轉(zhuǎn)化酶衰變的作用，效能類似于C4bp。

膜DAF廣泛分布于各種血細(xì)胞及其他各處的細(xì)胞上，包括紅細(xì)胞、粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞（T、B)、血小板、骨髓單個(gè)核細(xì)胞、紅細(xì)胞的始祖細(xì)胞，角膜、結(jié)合膜、消化道粘膜、外分泌腺、腎小管、膀胱、子宮粘膜、胞膜、心包及滑膜的上皮細(xì)胞，精子，以及培養(yǎng)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞上。但NK細(xì)胞上則缺如。陣發(fā)性血紅蛋白尿（paroxysmal nocturnalhemohlobulinuria,PNH)病人的紅細(xì)胞上也缺少DAF，并以缺乏程度將該病分為三個(gè)型。PNH病人的紅細(xì)胞對(duì)補(bǔ)體介導(dǎo)的溶血作用高度敏感，就是由于紅細(xì)胞上缺乏DAF及基它含GPI錨的分子而引起的。DAF帶有Cromer抗原。極少數(shù)稱之為Inaba或IFC缺乏的Cromer相關(guān)抗原的個(gè)體也缺乏DAF。

DAF生物學(xué)活性及生理功能已虱到充分證實(shí)。它可保護(hù)宿主細(xì)胞免遭補(bǔ)體介導(dǎo)的溶解破壞。其作用機(jī)理是，DAF不僅可阻止經(jīng)典或替代途徑C3和C5轉(zhuǎn)化酶的裝配，并且可通過(guò)誘導(dǎo)催化單位C2a或Bb的快速解離而使已形成的C4、C5轉(zhuǎn)化酶失去穩(wěn)定性，從而抑制補(bǔ)體攻擊單位的活化（圖5-15)。DAF的這種抑制作用僅限于直接結(jié)合在細(xì)胞上的C3、C5轉(zhuǎn)化酶，也即DAF不抑制靶細(xì)胞上正常的補(bǔ)體激活劑如微生物和免疫復(fù)合物。但DAF不能作為I因子裂解C3b和C4b的輔因子而發(fā)揮作用。另外，DAF雖不能阻止C2和B因子（分別通過(guò)與C4b或C3b結(jié)合)與細(xì)胞的最初結(jié)合，但卻可使C2a或Bb由它們結(jié)合的部位解離出來(lái)，以而阻止C3轉(zhuǎn)化酶的裝配。

圖5-15　DAF抑制替代途徑中C3轉(zhuǎn)化酶形成的的機(jī)理

編碼人DAF的基因位于第1號(hào)染色體的長(zhǎng)臂上32區(qū)一個(gè)800kb片段內(nèi)，與其它幾種補(bǔ)體激活調(diào)節(jié)劑（RCA)的基因緊密連鎖，排列順序依次為：MCP-CR1-CR2-DAF-C4bp。其中DAF基因的長(zhǎng)度約為C4bp。其中DAF基因的長(zhǎng)度約為35kb，以限制性酶譜分析表明為一單拷貝基因。在DAF基因的非編碼區(qū)還有3個(gè)限制性酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性（RFLP)結(jié)構(gòu)，兩個(gè)為HindⅢ酶切位點(diǎn)，1個(gè)為Bamh Ⅰ酶切位點(diǎn)。DAF的cDNA已克隆成功，并進(jìn)行了核苷酸和氨基酸序列分析。關(guān)于DAf cDNA和膜糖蛋白的結(jié)構(gòu)見圖5-16。DAF的cDNA結(jié)構(gòu)從5`端開始依次為：信號(hào)肽區(qū)、四個(gè)SCR（長(zhǎng)度1143bp)、富含絲氨酸與蘇氨酸（S/T)的區(qū)（約70個(gè)氨基酸)及疏水區(qū)，最后終止于3`端的poly（A)。由cDNA推導(dǎo)的氨基酸序列得出DAF蛋白由381個(gè)氨基酸所組成，包括34個(gè)氨基酸的信號(hào)肽，富含S/T的區(qū)為DAF中大多數(shù)延伸的O-連接的糖基化部位。SCR中有1上N-連接的的糖基化部位。C末端的疏水區(qū)在翻譯后被糖磷脂所取代，為DAF分子與細(xì)胞膜相結(jié)合的部位。

圖5-16　DAF cDNA和其膜糖蛋白的結(jié)構(gòu)

四、膜輔蛋白（CD4m.zxtf.net.cn/yishi/6)

膜輔蛋白（membranecofactor protein,MCP)由Cole等（1985)應(yīng)用C3b親和層析在外周血淋巴細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)的一種膜蛋白。由于其奇特的電泳特征，起初被命名為gp45-70，但進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，它對(duì)I因子介導(dǎo)的對(duì)C3b和C4b的裂解有輔助活性，故更命為MCP。鑒于MCP的多克隆抗體與促衷變因子（DAF)、H因子或CR1均不起反應(yīng)，從而認(rèn)為它是補(bǔ)體系統(tǒng)的一種新的調(diào)節(jié)蛋白，在第四屆國(guó)際白細(xì)胞分型討論會(huì)上將其命名為CD46。

MCP為一單鏈穿膜糖蛋白，分子量45-70kDa，屬于RCA基因簇的成員。也通過(guò)GPI錨固定于細(xì)胞上。MCP的細(xì)胞分布甚廣，包括粒細(xì)胞、血小板、T細(xì)胞（Th、Ts、Tc)、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、造血細(xì)胞系、成纖維細(xì)胞、表皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞及星狀膠質(zhì)細(xì)胞等。但不同類型的細(xì)胞上表達(dá)的數(shù)量有所不同。外周血單個(gè)核細(xì)胞和粒細(xì)胞為1萬(wàn)個(gè)/細(xì)胞，造血細(xì)胞系為2-5萬(wàn)個(gè)/細(xì)胞，Hela和Hep-2細(xì)胞分別為10萬(wàn)個(gè)/細(xì)胞和25萬(wàn)個(gè)/細(xì)胞。這種表達(dá)數(shù)量的差異，可能反映了MCP在正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞上不同的分化和活化狀態(tài)。另外，由于不同細(xì)胞上表達(dá)的MCP不同，因此可調(diào)節(jié)兩條激活途徑的C3轉(zhuǎn)化酶形成。這一點(diǎn)尤其重要，因?yàn)镃3慢速運(yùn)轉(zhuǎn)（tickover)的機(jī)制，能夠連續(xù)不斷的產(chǎn)生C3b與C4b，有可能形成越來(lái)越多的C3轉(zhuǎn)化酶。而由于大多數(shù)正常細(xì)胞上有高水平的MCP，因此可保護(hù)正常細(xì)胞免遭補(bǔ)體介導(dǎo)的損傷。相反，許多異物顆粒和致病微生物則缺乏MCP，這樣沉積在它們表面的C3b便可得以保持其活化；且C3b與B因子結(jié)合的親和力高于與H因子結(jié)合的親和力，從而促進(jìn)c 3bBb復(fù)合物的形成，導(dǎo)致在這些異物顆粒上補(bǔ)體有效地活化，最終將其破環(huán)清除。此外，細(xì)胞表面唾液酸的含量與其結(jié)合H因子和B因子的親和力有關(guān)，唾液酸含量較高的細(xì)胞與H因子的結(jié)合親和力超過(guò)與B因子的結(jié)合親和力，唾液酸含量較低的細(xì)胞則與此相反。許多細(xì)菌表面涶液酸的含量低于哺乳類動(dòng)物和人的細(xì)胞，因此侵入機(jī)體后易同B因子結(jié)合而導(dǎo)致補(bǔ)體替代途徑的激活。

圖5-17　MCP輔助I因子裂解C3b的機(jī)理

MCP作為一種補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白具有重要的生物學(xué)功能。在低離子強(qiáng)度下，它可與C3b或C3bi結(jié)合，但較CR1的親和力低。MCP的主要功能是其輔因子活性。即可與C3b或C4b結(jié)合而促進(jìn)I因子對(duì)C3b和C4b的裂解滅活（圖5-17)，從而保護(hù)自身宿主細(xì)胞免遭補(bǔ)體介導(dǎo)的溶解破環(huán)。有人將MCP的這種作用稱為內(nèi)源性輔因子活性。Seya等還發(fā)現(xiàn)MCP具有增強(qiáng)C3轉(zhuǎn)化酶的活性，尤其對(duì)替代途徑的C3轉(zhuǎn)化酶，但其生理意義尚不明了。CR1和H因子也是具有輔因子活性的補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白，但H因子的這一活性僅為MCP的1/50。

人MCP的基因定位于第1號(hào)染色體長(zhǎng)臂32區(qū)，基因長(zhǎng)度至少為43kb，含有14個(gè)外顯子和13個(gè)內(nèi)含子。Seym.zxtf.net.cn/wsj/a等用從HSB-2T細(xì)胞純化獲得的MCP氨基末端設(shè)計(jì)了一個(gè)17mer的反義寡核苷酸探針，以此從U937的cDNA文庫(kù)中篩選到一條長(zhǎng)1.5kb的cDNA。經(jīng)測(cè)序表明，該cDNA中含有一個(gè)43bp的5`端非編碼區(qū)和一個(gè)編碼384個(gè)氨基酸的開讀框。其中前34個(gè)氨基酸為信號(hào)肽，后350個(gè)氨基酸為MCP的多肽鏈，分子量為39kDa。在多肽鏈的前250個(gè)氨基酸中，含有4個(gè)相鄰的CSR。SCR后為一段富含絲氨酸、蘇氨酸和脯氨酸殘基的29個(gè)氨基酸片段（可能是高度O-連接的 糖基化位點(diǎn))，再后依次為13個(gè)氨基酸的功能不明區(qū)、24個(gè)氨基酸的跨膜區(qū)、105個(gè)氨基酸的胞漿錨和23個(gè)氨基酸構(gòu)成的胞漿尾部。大多數(shù)MCCP的變異局限在富含絲氨酸/蘇氨酸（S/T)區(qū)和胞漿尾部。在核苷酸序列上MCP與DAF具有同源性。

五、H因子

H因子由Nilson等（1965)發(fā)現(xiàn)，根據(jù)電泳位將其命名為β₁H，而Whaley和Ruddy則將其命名為C3b滅活劑加速因子。現(xiàn)已確定其為由1213個(gè)氨基酸組成的單鏈糖蛋白，分子量155kDa，既有長(zhǎng)桿狀部分，也有球形區(qū)域。新近用透射電鏡檢查發(fā)現(xiàn)，H因子的影象為一長(zhǎng)而柔順的分子。伸長(zhǎng)型分子長(zhǎng)49.5nn，橫截直徑為3.4mm但大多數(shù)不呈線型而呈折疊狀，因此分子的實(shí)際長(zhǎng)度僅為伸展型的一半，但其構(gòu)象則呈多樣化。通過(guò)園二色譜分析表明，H因子既無(wú)α螺旋也無(wú)β折疊，借二硫鍵維持其功能活性的構(gòu)象。H因子的功能包括以下幾個(gè)方面：（1)為Ⅰ因子的輔助因子，可增加C4b對(duì)Ⅰ因子的敏感性。在無(wú)H因子時(shí)，Ⅰ因子與C3b的結(jié)合呈絲狀；而在有H因子存在時(shí)，I因子與C3b的結(jié)合變?yōu)閺澖z狀，同時(shí)與C3b的結(jié)合親和力增強(qiáng)（較無(wú)H因子時(shí)至少高15倍)。H因子強(qiáng)化I因子的機(jī)理，可能是H因子與C3b結(jié)合后，使C3b出現(xiàn)某些構(gòu)象變化，增加了與I因子結(jié)合的親和力。H因子與C3b結(jié)合的活性部位存在于其N端35kDa部分。（2)加速C3轉(zhuǎn)化酶的衷變：H因子能將已同C3b結(jié)合的B因子或Bb從C3酶中逐出，而使之失去酶活性。（3)阻止替代途徑中初始和放大C3轉(zhuǎn)化酶的形成。已證實(shí)H因子和B因子在C3b上有同一結(jié)合部位，故H因子可同B因子或Bb競(jìng)爭(zhēng)與C3b的結(jié)合。在有H因子存在時(shí)，B因子不易與C3（H₂C)及C3b結(jié)合，因此不易形成C3（H₂C)Bb或C 3bBb。但H因子對(duì)固相上和液相中的C3b作用在差別。對(duì)液相中或結(jié)合于非激活劑固相上裂解。而對(duì)于固定到激活劑（如酵母多糖等)表面的C3b，H因子則對(duì)C3b的親和力與B因子相當(dāng)，二者競(jìng)爭(zhēng)的結(jié)果，可形成部分C3轉(zhuǎn)化酶，以保證替代途徑的活化。有研究報(bào)道，在細(xì)胞膜上能增強(qiáng)C3b對(duì)H因子親和力的化學(xué)成分是涎酸和肝素氨基多糖。由于大多數(shù)細(xì)菌表面缺乏涎酸，因而這些細(xì)菌侵入機(jī)體后，可活化替代途徑，有助于在早期對(duì)感染的控制。（4)對(duì)已與P因子或腎炎因子（NeF)結(jié)合形成穩(wěn)定的c 3bBbP或C 3bBbNeF，H因子對(duì)它們也有一定的作用，但其效力要比CR1差得多。H因子對(duì)C5轉(zhuǎn)化酶（c 3bnBb或C 3bBb3b)的活性也有抑制作用，并能與C5競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合C3b使C5不能裂解。此外，近年發(fā)現(xiàn)H因子還可誘導(dǎo)單核細(xì)胞分泌IL-1參與免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)。

編碼H因子的基因定位于人的第1號(hào)染色體的長(zhǎng)臂32區(qū)，具有多態(tài)性。已發(fā)現(xiàn)其有5個(gè)變異型，即FH1-5。H因子的核苷酸序列已進(jìn)行了鑒定，并推導(dǎo)出其全部氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，含有20個(gè)SCR借此與C3b結(jié)合。H因子與MCP、CR1、CR2、DAF及C4bp具有同源性，共同屬于補(bǔ)體激活調(diào)節(jié)劑（RCA)基因家族的成員。

六、I因子

I因子（舊稱C3bINA)為異源二聚體血清蛋白，呈雙球狀結(jié)構(gòu)，分子全長(zhǎng)13nm。其中小球（L鏈)4.9nm，具有絲氨酸蛋白酶活性；大球（H鏈)5.4nm可與C3b結(jié)合。I因子的分子量為88kDa，重鏈50kDa，輕鏈38kDa，鏈間以二硫鍵相連接。I因子的生物學(xué)活性是，在C4bp、MCP、H因子和CR1等輔助因子的協(xié)同下，將C4b裂解為C4d和C4c;使C3b裂解出C3f形成C3bi,后者再進(jìn)一步裂解為C3dg和C3c，由此而控制補(bǔ)體系統(tǒng)的活化。

編碼入I因子的基因定位于第4號(hào)染色體上。經(jīng)對(duì)I因子的cDNA序列分析發(fā)現(xiàn)，其輕鏈為絲氨蛋白酶的活性區(qū)，與糜蛋白酶、胰蛋白酶及彈性蛋白酶等有同源性。而其重鏈?zhǔn)蔷哂懈缓��?a class="channel_keylink" href="http://m.zxtf.net.cn/pharm/2009/20090107120558_48129.shtml" target="_blank">胱氨酸的功能區(qū)，與C8、C9和低密度脂蛋白受體等具有同源性。I因子結(jié)構(gòu)基因的突變，可導(dǎo)致先天性I因子缺陷，此類患C3的過(guò)度消耗面引起反復(fù)感染和血管性水腫。

七、過(guò)敏毒素滅活劑

過(guò)敏毒素滅活劑（AI)又稱血清羧肽酶N，分子量310kDa，由8條相同的多肽鏈組成，每條分子量各36kDa。AI具有羧基肽酶的活性，可去除C4a、C3a、和C5a C末端的精氨酸殘基，使這些片段喪失其過(guò)敏毒素活性。

八、S蛋白

S蛋白（CP或S)為血清中一種α單鏈糖蛋白，分子量83kDa。SP的主要調(diào)節(jié)作用是可與C5b～7的亞穩(wěn)態(tài)結(jié)合部位競(jìng)爭(zhēng)靶細(xì)胞膜脂質(zhì)，通過(guò)形成親水性的SPC5b～7（簡(jiǎn)寫為S5b～7)復(fù)合物，而使C5b～7失去膜結(jié)合活性。這樣，便可保護(hù)補(bǔ)體活化部位鄰近的細(xì)胞免遭偶然的攻擊。這種親水性的SC5b～7還可集資與1個(gè)分子的C8和3個(gè)分子的C9結(jié)合，分別形成SC5b～8和C5b～（9)3復(fù)合物，并C9聚合形成孔道，從而可保護(hù)補(bǔ)體活化部位鄰近的細(xì)胞免于遭受補(bǔ)體的攻擊而損傷。SP與C8和C9的結(jié)合部位為這兩種分子中富含半胱氨酸的功能功能區(qū)。電鏡下觀察，SC5b～（9)3復(fù)合物呈一楔形結(jié)構(gòu)，SP位于楔形的寬部可掩蓋補(bǔ)體蛋白的疏水區(qū)，從而封閉MAC的膜結(jié)合部位。此外，2～3個(gè)分子的SP與C5b～7與C5b～8復(fù)合物的結(jié)合，還可使這些復(fù)合物易溶，出現(xiàn)親水向疏水轉(zhuǎn)換。SP也參與凝血過(guò)程，通過(guò)干擾抗凝血酶Ⅲ對(duì)凝血酶的來(lái)活而保護(hù)凝血酶。

編碼人SP基因定位于第17號(hào)染色體的長(zhǎng)臂上，其cDNA已克隆成功。經(jīng)過(guò)序列分析表明，其與具有細(xì)胞粘附作用的玻璃粘連蛋白（vitronectin)的序列完全相同，已證明二者屬同一蛋白。

九、CD59

CD59是近年（1989)才發(fā)現(xiàn)的一種分子量只有18～20kDa的膜性調(diào)節(jié)蛋白。由Sugita等（1988年)首先描述，曾有不同的名稱，如同種限制因子20（homologous restriction factor-20),保護(hù)素（protectin)及膜反應(yīng)性溶破抑制物（membraneinhibitor of reactive lysis,MIRL)等。CD59由103個(gè)氨基酸殘基組成，含有單一的N端糖基化位點(diǎn)，其C端借GPI錨固定于細(xì)胞表面。CD59分布甚廣泛，已證明皮膚、肝、腎、胰、肺、唾腺、神經(jīng)系統(tǒng)、胎盤以及各種血細(xì)胞（紅細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及血小板)和精子上均有表達(dá)。C59的主要生理功能是，防止MAC對(duì)同種或自身細(xì)胞的溶解破壞，即同種限制作用（homologous species restriction,HSR)。作用機(jī)理為：通過(guò)其與C7、C8或C9的結(jié)合而阻止MAC組裝。當(dāng)其與C5b～7復(fù)合物結(jié)合后，可阻止其再與C8結(jié)合；當(dāng)基與C8結(jié)合后，則可阻礙結(jié)合至MAC上的第1個(gè)C9分子的鋪展，從而是阻止后繼C9的結(jié)合；而當(dāng)其與MAC中的C9結(jié)合后，又可阻止C9進(jìn)一步分子的聚合。這樣，在有CD59存在的情況下，在同種或自身細(xì)胞的表面便不能順利地完成MAC的全部組裝，或不能組裝成C5b～（9)n復(fù)合物，從而限制了對(duì)同種或自身細(xì)胞的溶解作用。Rooney等（1991)的報(bào)道表明，CD59的這種同種限制作用的機(jī)理對(duì)保護(hù)子宮內(nèi)的胎兒不被MAC的攻擊也有作用。此外，CD59還促進(jìn)T細(xì)胞粘附與激活，維持精子在女性生殖道內(nèi)的穩(wěn)定性與活性，以及參與PNH發(fā)病機(jī)理的作用。

CD59的cDNA已經(jīng)克隆，并確定CD59的基因定位于人的第11號(hào)染色體短臂，其核苷酸序列與氨基酸序列相對(duì)應(yīng)，并與小鼠的CD59有同源性。

十、SP40/40

自1982年起，生物科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)中先后提出一批術(shù)語(yǔ)。后經(jīng)鑒定它們都是蛋白質(zhì)，且結(jié)構(gòu)類同、功能相近，與補(bǔ)體的末端成分相關(guān)。這些成分有不同的名稱：如Clusterin、SGP-2、SP40/40、TRRM-2、T64、GP111、SP80、CLI、apo-J和NA1/NA2等。Fritz等建議用Clusterin（暫譯為群集素)來(lái)概括。

群集素的調(diào)節(jié)作用是在SP40/40這一同源體中發(fā)現(xiàn)的。SP40/40是于70年代末首先在人精漿中發(fā)現(xiàn)的，繼后在腎小球沉積的IC、血液和MAC中也檢出。并由于基常伴隨末端補(bǔ)體復(fù)合物而存在，故認(rèn)為其是末端補(bǔ)體復(fù)合物的成員之一。SP40/40為血漿中的α糖蛋白，分子量80kDa，由分子量均為40kDa的α和β亞單位所組成，所以稱其為SP40/40�，F(xiàn)知SP40/40由427個(gè)氨基酸殘基所組成，α亞單位為222個(gè)氨基酸殘基，β亞單位為205個(gè)氨基酸殘基。α和β亞單位借3個(gè)二硫鍵相連接而構(gòu)成一異二聚體。兩個(gè)亞單位的氨基酸組成除甘氨酸外，其余均很相似，但氨基酸的序列則相差明顯。人血漿中SP40/40的含量為35～105μg/ml（平均62μg/ml)，但在人精漿中卻可高達(dá)15mg/ml，認(rèn)為這與保護(hù)精子的活性有關(guān)。

SP40/40是MAC組裝的調(diào)節(jié)蛋白。它可與C5b～7、C5b～8或C5b～9結(jié)合，對(duì)MAC的組裝起抑制作用，從而可防止MAC的溶細(xì)胞作用。此外SP40/40與S蛋白還具有協(xié)同作用，可使MAC變?yōu)榭扇苄缘亩�失去溶�?xì)胞作用�，F(xiàn)知C8與SP40/40的結(jié)合部位是C8β、C9與SP40/40的結(jié)合部位是C9b。

十一、同種限制因子

同種限制因子（homologousrestriction factor,HRF)，又稱C8結(jié)合蛋白（C8bp)。為Zalman等（1986)用C9-Sepharose親和層析從人紅細(xì)胞膜上分離的一個(gè)能與C8、C9結(jié)合并參與C9階段同種限制性的膜蛋白，通過(guò)GPI錨固定于細(xì)胞膜表面。新鮮紅細(xì)胞膜上的HRF分子量為65kDa，而在冷凍的陳舊性紅細(xì)胞膜上則降解為38kDa。HRF存在于正常人的紅細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及血小板上。HRF對(duì)反應(yīng)性溶血作用的嚴(yán)格的種屬限制性。如經(jīng)抗HPF抗體處理的人紅細(xì)胞對(duì)人C8、C9的反應(yīng)性溶血作用敏感性增高，而對(duì)8種動(dòng)物來(lái)源的C8、C9的反應(yīng)性溶血作用則不敏感。體外試驗(yàn)表明，HRF能抑制C9與C8的結(jié)合及C9聚合，從而阻止MAC插入自身細(xì)胞的膜脂質(zhì)雙層及細(xì)胞溶解。HRF可能還與淋巴細(xì)胞殺（C9RP)介導(dǎo)的人大顆粒淋巴對(duì)羊紅細(xì)胞和PNH患者紅細(xì)胞的ADCC作用。

關(guān)于上述11種補(bǔ)體調(diào)節(jié)分子的特性及生物學(xué)活性見表5-2

表5-2　補(bǔ)體調(diào)節(jié)分子的特性及生物學(xué)活性