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DNA的一級結(jié)構(gòu)與功能

 

  2.原核生物基因組結(jié)構(gòu)特點

 、倩蚪M較小,沒有核膜包裹,且形式多樣,如病毒基因組可能是DNA,也可能是RNA,可能是單鏈的,也可能是雙鏈的,可能是閉環(huán)分子,也可能是線性分子;細(xì)菌染色體基因組則常為環(huán)狀雙鏈DNA分子,并與其中央的RNA和支架蛋白構(gòu)成一致密的區(qū)域,稱為類核(nucleoid)。

 、诠δ芟嚓P(guān)的結(jié)構(gòu)基因常常串連在一起,并轉(zhuǎn)錄在同一個mRNA分子中,稱為多順反子mRNA(polycistronic mRNA),然后再加工成各種蛋白質(zhì)的模板mRNA。

 、跠NA分子絕大部分用于編碼蛋白質(zhì),不編碼部分(又稱間隔區(qū))通常包含控制基因表達(dá)的順序。例如,噬菌體ψx 174中只有5%是非編碼區(qū)。醫(yī)學(xué)網(wǎng)站www.med126.com

 、芑蛑丿B是病毒基因組的結(jié)構(gòu)特點,即同一段DNA片段能夠編碼兩種甚至三種蛋白質(zhì)分子。

 、莩婧思(xì)胞病毒外,基因是連續(xù)的,即不含內(nèi)含子序列。

  (三)限制性片段長度多態(tài)性

  隨著對基因認(rèn)識的不斷深入,發(fā)現(xiàn)在同種生物的不同個體之間,盡管其蛋白質(zhì)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)和功能完全相同或僅存在著細(xì)微的差異,但在DNA水平卻存在著差異,尤其在不編碼蛋白質(zhì)的區(qū)域以及沒有重要調(diào)節(jié)功能的區(qū)域表現(xiàn)更為突出。這種不影響生物體表型的DNA突變被稱為中性突變。

  分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展已使得從DNA水平直接分析這類突變成為可能。

  目前應(yīng)用較多且成熟的方法是限制性片段長度多態(tài)性(Restriction fragment length polymorphism,RFLP)。即當(dāng)DNA序列中某一個堿基發(fā)生突變,使突變所在部位的DNA序列獲得或丟失某種限制性核酸內(nèi)切酶位點;或當(dāng)DNA分子內(nèi)部發(fā)生較大的順序突變?nèi)缛笔、重?fù)、插入,或DNA高變區(qū)內(nèi)某串聯(lián)重復(fù)順序的拷貝數(shù)不同致使其兩側(cè)限制性核酸內(nèi)切酶位點發(fā)生相對位移時,利用相應(yīng)的限制性核酸內(nèi)切酶消化此DNA,便會產(chǎn)生與正常不同的限制性片段。這樣,在同種生物的不同個體中就會出現(xiàn)不同長度的限制性片段類型。

  因為DNA的中性突變常以孟德爾顯性遺傳方式遺傳給下一代,所以對這類突變檢測已廣泛用于遺傳病的診斷、產(chǎn)前診斷、親子鑒定以及法醫(yī)學(xué)上對罪犯的確認(rèn)等。

  (四)DNA序列分析(DNa sequencing)

  DNA的一級結(jié)構(gòu)決定了基因的功能,欲想解釋基因的生物學(xué)含義,首先必須知道其DNA順序。因此DNA序列分析是分子遺傳學(xué)中一項既重要又基本的課題。

  1986年由美國學(xué)者提出的,目前正在實施的人類基因組計劃(human genome project),則是要通過對人類基因組3×109bp全序列的序列分析和人類基因的染色體圖譜制定達(dá)到了解其結(jié)構(gòu),認(rèn)識其功能,即從分子遺傳學(xué)水平來認(rèn)識人類自身的結(jié)構(gòu)和功能特征的目的。

  核酸的核苷酸序列測定方法已經(jīng)過近20年的發(fā)展,因而測序的具體方法五花八門、種類繁多。但是究其所依據(jù)的基本原理,不外乎Sanger的核酸鏈合成終止法及Maxam和Gilbert的化學(xué)降解法兩大類。雖然原理不同,但這兩種方法都同樣生成互相獨立的若干組帶放射性標(biāo)記的寡核苷酸,每組寡核苷酸都有固定的起點,但卻隨機(jī)終止于特定的一種或多種殘基上。由于DNA鏈上每一個堿基出現(xiàn)在可變終止端的機(jī)會均等,因而上述每一組產(chǎn)物都是一些寡核苷酸的混合物,這些寡核苷酸的長度由某一種特定堿基在原DNA片段上的位置所決定。然后在可以區(qū)分長度僅相差一個核苷酸的不同DNA分子的條件下,對各組寡核苷酸進(jìn)行電泳分析,只要把幾組寡核苷酸加樣于測序凝膠中若干個相鄰的泳道之上,即可從凝膠的放射自顯影片上直接讀出DNA上的核苷酸順序。以下分別介紹。

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