胃腸道產(chǎn)生的分泌性IgA（SIgA)在其粘膜表面形成重要的免疫保護(hù)層能防止抗原性物質(zhì)進(jìn)入粘膜，對局部炎癥和腫瘤的發(fā)生發(fā)展起重要作用，也是近年來研究局部粘膜免疫反應(yīng)的重要課題。
一、SIgA合成及其功能
人體內(nèi)主要含有兩種形式IgA。一種為s IgA單體，主要存在血清中，多來自脾臟、骨髓和腸系膜淋巴細(xì)胞的漿細(xì)胞。另一種是與分泌成分（secretory component, SC)結(jié)合的二聚體，即SIgA，沉降系數(shù)為11S，主要存在唾液、初乳及胃腸道等分泌液中。成人腸道每天能分泌3gSIgA。目前多認(rèn)為胃腸道是s IgA的中樞器官。SIgA由SC、J鏈和二個(gè)IgA單體組成，形成過程包括：SC的合成、J鏈和IgA合成、IgA與SC結(jié)合和SIgA分泌。SC是分子量為83000dalton左右的糖蛋白，由549～558個(gè)氨基酸和20%糖組成，其轉(zhuǎn)錄基因在上皮細(xì)胞的第1對染色體上。我們用免疫細(xì)胞化學(xué)染色證實(shí)SC主要分布在分泌性腺上皮細(xì)胞基底側(cè)膜及游離腔面的胞漿內(nèi)。杯狀細(xì)胞含SC很少。SC作為免疫球蛋白的受體在SIgA的合成中起重要作用。目前已經(jīng)證實(shí)SC與胃腸道固有層IgA產(chǎn)生細(xì)胞分泌的二聚體和J鏈形成二硫鍵。雖然40%IgG和IgD產(chǎn)生細(xì)胞也含有J鏈，但很快被溶解，故SC不能與IgG與IgD相結(jié)合。SC能與IgM五聚體結(jié)合，但結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，易被消化酶破壞。SC與IgA結(jié)合及SIgA分泌過程是近年來研究的重點(diǎn)課題。SC作為特異性受體位于上皮細(xì)胞膜上，其膜外部分（最外層100個(gè)氨基酸殘基，即SC1)非共價(jià)鍵與J鏈和IgA的α鏈可變區(qū)（Cα3)結(jié)合，SC緊靠細(xì)胞膜部分（SC5)與IgA二聚體的另一條鏈α鏈（Cα2)形成二硫鍵。結(jié)合的SIgA通過細(xì)胞吞飲作用（pinocytosis)進(jìn)入胞漿，在上皮細(xì)胞腔面釋放，近年的研究表明，小白鼠的肝細(xì)胞和人膽管上皮細(xì)胞也能合成SC。人膽汁中含有IgA單體多來自血液，少部分來自門脈區(qū)及膽管內(nèi)皮細(xì)胞下漿細(xì)胞。有趣的是有人發(fā)現(xiàn)慢性肝硬化患者周圍血B淋巴細(xì)胞也能產(chǎn)生IgA二聚體，其機(jī)理還不清楚。
SIgA分布在粘膜表面，能封閉細(xì)菌和病毒等抗原表面及其受體結(jié)合部位或與之凝集成團(tuán)狀，阻止病毒和細(xì)菌和粘附。SIgA與相應(yīng)抗原結(jié)合還可激活補(bǔ)體的替代途徑，造成抗原溶解，近年來也有人發(fā)出IgA也能通過ADCC發(fā)揮細(xì)胞毒作用。有人發(fā)現(xiàn)先天性缺乏SIgA的病人惡性腫瘤的發(fā)病率比正常人高20～50倍。小腸之所以很少發(fā)生惡性腫瘤，粘膜中含85%以上的IgA產(chǎn)生細(xì)胞是重要因素之一。因此，深入研究SIgA與消化道炎癥，感染和腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系有臨床實(shí)用價(jià)值。
二、對比免疫熒光染色
1．染色特點(diǎn)
�。�1)要進(jìn)行SC和IgA組織定位，必須有相應(yīng)特異抗血清。SC抗血清國內(nèi)沒有生產(chǎn)。國內(nèi)商品IgA抗血清的抗原多來自人乳中的SIgA，具有雙重抗原性（SC和IgA)，不能特異進(jìn)行IgA組織定位，最好采用抗人α-重鏈抗血清。
�。�2)SC是糖蛋白，IgA是免疫球蛋白。在組織處理上雖然有人提出用冷凍切片或福爾馬林固定胰酶消化的方法，我們的體會(huì)用冷酒精直接固定法既簡單又方便。
（3)SC和IgA除一部分在細(xì)胞內(nèi)，也可以分布于間質(zhì)和粘膜表面。為了提高特異性，除了染色前用瓊脂擴(kuò)散、對照試驗(yàn)、吸收試驗(yàn)和抑制試驗(yàn)等方法檢驗(yàn)抗體的特異性和敏感性外，可采用伊文氏藍(lán)作對比染色。伊文氏藍(lán)肉眼下是藍(lán)色，在熒光鏡下是紅色，混合染色后能襯托FITC的綠色熒光，同時(shí)抑制非特異性熒光，不影響抗原抗體結(jié)合。如果特異性染色后再加伊文氏藍(lán)，比較費(fèi)時(shí)間，效果不一定最佳。先用伊文氏藍(lán)染組織切片，再進(jìn)行特異性抗體染色能抑制抗原抗體結(jié)合，不宜使用。
2．染色步驟
（1)組織加工、固定及切片與抗體產(chǎn)生細(xì)胞研究（不需PBS浸洗)相同。先做HE染色，選縱向連續(xù)切片，脫蠟后在4℃PBS中浸洗3～5min，過一次蒸餾水后風(fēng)干待染。
�。�2)用伊文氏藍(lán)PBS稀釋FITC標(biāo)記的SC和IgA抗體，加在連續(xù)組織切片上，放入濕盒，37℃溫箱放置45min。
�。�3)取出切片，用BPS浸洗3次，每次5～10min。
�。�4)過一次蒸餾水后風(fēng)干，50%甘油封片，熒光顯微鏡觀察。
3．結(jié)果判斷和分析 熒光鏡下組織切片底色為紅色熒光，SC和IgA呈綠色熒光。IgA和SC主要分布在分泌性腺體腔面、上皮細(xì)胞側(cè)膜及基底部，IgA還分布在間質(zhì)及固有層IgA產(chǎn)生細(xì)胞漿內(nèi)�？筛鶕�(jù)熒光強(qiáng)度進(jìn)行SC和IgA半定量分析，也可以用熒光光度計(jì)或數(shù)字減影技術(shù)進(jìn)行準(zhǔn)確定量。
